ELISA试剂盒洗涤很重要及抗体浓度须优化
时间:2019-03-27 阅读:479
ELISA试剂盒实验的原理似乎很简单,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,间中夹杂着
洗涤和封闭。然而,即使是平淡无奇的洗涤和封闭,如果做得不太好,也有可能毁了整个实验
。在实验结束时,我们是否能获得有意义的信息,这在很大程度上取决于结果的信噪比。背景
噪音会影响您对结果的判断。如何降低ELISA的背景,下面有一些tips。
洗涤很重要
洗涤步骤看似很无聊,其实很重要,因为如果未结合的材料(如非特异结合的抗体或检测试剂)
残留在微孔板中,那么它会增加背景噪音。如有必要,可增加洗涤液中的盐浓度,这会阻止非
特异结合反应。如果背景过高,而您怀疑洗涤不够时,可以尝试增加洗涤次数。
抗体浓度须优化
我们通常会follow师兄师姐留下来的操作步骤,但是如果试剂稍有不同,则可能需要优化抗体
的量。记住,非特异的抗体结合会增加背景。为了防止这一点,切勿使用过多的一抗或二抗。
检测试剂要适量
另一点也很显而易见:切勿使用过多的检测试剂。如果浓度过高,或者未正确稀释,则会导致
高背景。也不要显色过度,如有必要,优化一下何时应加入终止液。
如果您的ELISA不幸地遇到了高背景,那么也无需太担心,依次查看ELISA系统中的组分,
并排除可能存在的问题。悉心优化,相信很快就会有漂亮的结果。