目前，免疫学检验中的标记技术主要包括酶免疫技术、荧光免疫技术、放射免疫技术、金免疫技术、化学发光免疫技术等。其中酶免疫技术是以酶标记的抗体（抗原）作为主要试剂，将抗原抗体反应的特异性和酶催化底物反应的性和专一性结合起来的一种免疫检测技术。作为经典的三大标记技术之一，酶免疫技术在检验医学中得到广泛应用并不断得到更新。

一、常用的酶及显色底物

　　在酶免疫技术中用于标记的酶应具有催化活性高、催化专一性强；与抗原抗体偶联后不影响抗原抗体的免疫反应性和酶活性；催化的底物易于配制、保存且催化底物产生的信号产物易于观察和检测；对人无害且价廉、易得等特点，目前常用的酶及底物见表1。

表1 常用酶及底物

常用酶 底物 加终止液前颜色 加终止液后颜色

辣根过氧化物酶（HRP） 邻苯二胺（OPD） 橙黄色 棕黄色

RZ>3.1 四甲基联苯胺（TMB） 蓝色 黄色

碱性磷酸酶（AP） 对硝基苯磷酸酯（p-NPP） 黄色 黄色

二、标记物的制备

　　在酶免疫技术中制备标记物的抗原应纯度高、抗原性完整；制备标记物的抗体应特异性好、效价高、亲和力强、比活性高、能批量和易于分离纯化。

　　制备酶标记物的方法应符合简单、产量高；避免酶、抗体（抗原）、酶标记物各自形成聚合物；标记反应不影响酶的活性和抗原抗体的免疫反应性等原则。标记物制备的方法基本属于两类：

（一） 交联法

　　交联法是以一可同时与酶和抗体（抗原）结合的 交联剂作为“桥”，分别连接酶与抗体（抗原）的方法，此类方法中目前zui常用的是戊二醛交联法，形成的结合物为：酶-戊二醛-抗体（抗原）

（二） 直接法

　　直接法是用一活化剂首先将酶活化，被活化的酶分子上的基团直接可与抗体（抗原）结合形成标记物，如过碘酸钠法。形成的结合物为：酶-抗体（抗原）。

三、酶免疫技术类型

　　酶免疫技术按照抗原抗体系统是定位于组织细胞上还是存在于液体样品中分为酶免疫组化技术和酶免疫测定（EIA），酶免疫测定又可分为均相酶免疫测定和异相酶免疫测定。