双孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)操作步骤如下：

1 液体石蜡的准备 选用优质化学纯液体石蜡，将液体石蜡分装加塞，用牛皮纸包好，采用以下两种方式进行灭菌：121℃湿热灭菌30min，置40℃恒温箱中蒸发水分，经无菌检查后备用。160℃干热灭菌2个小时，冷却后，经无菌检查后备用。

2 斜面培养物的制备   参照定期移植法。

3 灌注石蜡  将无菌的液体石蜡在无菌条件*入培养好的新鲜斜面培养物上,液面高出斜面顶部1cm左右，使菌体与空气隔绝。

4 保藏 4.1　注入液体石蜡的菌种斜面以直立状态置低温（4～6℃）干燥处保藏，保藏时间2～10年。 4.2　保藏期间应定期检查，如培养基露出液面，应及时补充无菌的液体石蜡。

5 恢复培养   恢复培养时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后，再重新转接一次。

培养及打管说明：

1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。

2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。

3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长

4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。

5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。