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小鼠淋巴瘤细胞;EL4培养操作流程

时间:2024-10-05      阅读:102

    在完成了小鼠淋巴瘤细胞EL4的基本准备与复苏步骤后,接下来是细胞培养的关键阶段。首先,将复苏后的EL4细胞悬液轻轻吹打均匀,以避免细胞团块的形成,这有助于细胞在培养环境中的均匀分布和生长。随后,使用台盼蓝染色法检测细胞活力,确保大部分细胞保持活性,为后续的实验提供可靠的细胞基础。

     接着,根据实验需求调整细胞密度,通常将细胞悬液稀释至适宜的浓度后,接种至预先准备好的含有培养基(包括RPMI-1640培养基、10%胎牛血清、双抗等)的培养瓶中。注意在接种过程中避免产生气泡,气泡可能会干扰细胞贴壁或造成培养基分布不均。

    培养瓶置于37℃、5% CO2的恒温培养箱中培养,这是维持EL4细胞正常生长代谢的必要条件。每日需观察细胞生长情况,包括形态、密度及培养基的颜色变化,以判断是否需要更换新鲜培养基或进行传代培养。一般而言,当细胞密度达到80%-90%时,应进行传代操作,以避免细胞因过度生长而衰老或死亡。

    在传代时,首先轻轻吸去旧培养基,加入适量PBS缓冲液洗涤细胞表面,去除残留的培养基和死细胞。然后,加入适量胰酶进行消化,待细胞边缘变圆、轻轻摇晃即可脱落时,立即加入含血清的培养基终止消化。通过轻柔吹打使细胞分散成单细胞悬液,并按需进行传代接种或收集细胞进行后续实验。

     通过精心细致的操作和持续的观察,可以确保EL4细胞在体外培养过程中保持稳定的生长状态,为后续的科学研究提供可靠的细胞模型。

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