注意事项

1、使用产品时应注意无菌操作，避免污染。

2、本产品含有血清和双抗，如无特别需要不用额外再添加血清和双抗，可以直接使用。

3、为保持本产品的最佳使用效果，不宜将其长时间放置于室温或较高的温度环境中。

4、所有产品请于保质期内使用，超出保质期，必须放弃使用。

5、本产品只供进一步科研使用，不可应用于临床等其他方面。

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产品名称：支气管成纤维细胞*培养基

规格：100mL/125mL×4

货号：YS-02X9988

产品分类:细胞培养基

储存条件2℃-8℃，避光储存

运输条件冰袋冷藏运输

实验材料：

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶

2. 100ml灭菌烧杯2个； 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞

3、50ml离心筒2个

4、灭菌培养皿1个，细胞培养瓶1个

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个

6、细胞计数板1块；

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；

8、酒精灯1台；

细胞复苏步骤：

1：水浴锅预热至37℃备用

2：准备15mL离心管，并向其中加入适量培养基待用

3：将细胞冻存管从-80℃冰箱或液氮中取出，放入PE手套中，迅速投入水浴锅

4：用力摇晃冻存管，使其在1分钟内融化

5：用纸巾擦拭水渍，转移至生物安全柜。用移液枪吸取细胞悬液，缓慢滴加到步骤2中准备好的离心管

6：1200rpm离心3分钟

7：弃上清，用新鲜培养基重悬细胞，接种至新的无菌培养器皿中

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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