详细介绍：

英文名称：EMT Research Antibody Assembly kit

英文别名:EMTResearchAntibodyAssemblykit(E-Cadherin,N-Cadherin,Vimentin,Occludin,ZO-1)

交叉反应:Human, Mouse, Rat

标记:Unconjugated

抗体来源:Rabbit

抗体类型:Polyclonal

蛋白细胞定位:细胞浆,细胞膜

纯化方法:AffinitypurifiedbyProteinA

亚型:IgG

性状:Liquid

浓度:1mg/ml

储存液:0.01MTBS(pH7.4)with1%BSA,0.03%Proclin300and50%Glycerol.

保存条件:Shippedat4℃.Storeat-20°Cforoneyear.Avoidrepeatedfreeze/thawcycles. 
公司产品仅用于科研  

抗体制备过程：

1.材料与试剂

 a．提取的动物 Ig

 b．弗氏佐剂和弗氏佐剂

 d．实验动物 兔

 e．其它材料及试剂

2、选择实验活体。

3、进行动物免疫实验。

4、试取血样进行测试，查看免疫效果。

5、如果免疫成功，杀死实验活体，采集全部血清。

6、纯化出抗体。

7、鉴定抗体。胎牛血清（无菌采制）
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操作步骤:

1.脱蜡水化。将石蜡切片置于新鲜二甲苯脱中浸泡 15 分钟,重复三次。去除多余的液体后,依次置于无水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇,各浸泡 5 分钟,蒸馏水(或自来水)冲洗 5 分钟。用 PBS 缓冲液(试剂 1,将干粉溶解于 1L 去离子水中)冲洗切片 5 分钟,重复三次。

2.抗原修复。将脱蜡水化后的组织切片置于烧杯(或修复盒)中的耐高温塑料切片架上,加适量修复液 1× 柠檬酸钠抗原修复液(试剂 2,将 100×柠檬酸钠抗原修复液加去离子水稀释成 1×柠檬酸钠抗原修复液),液面要浸过切片组织一定高度,将修复盒置于沸水中煮沸修复 15 分钟后取出玻片,自然凉至室温。用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。

注意:抗原修复时,修复液务必保证切片始终浸泡在液体内,一般情况:修复液的量约为 800mL/1 架。
3.阻断内源性过氧化物酶。用吸水纸擦干玻片,免疫组化笔在组织周围画圈,滴加 50μL 内源性过氧化物酶阻断剂(试剂 3)到切片组织上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育 30 分钟,用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。

4.血清封闭。用吸水纸擦干玻片,滴加 50μL 正常山羊血清工作液(试剂 5),37℃封闭 20 分钟,以减少非

特异性染色。

5.一抗孵育。用抗体稀释液(试剂 4)将一抗原液稀释成工作液,用吸水纸擦干玻片组织周围的液体,滴加适量抗体工作液,置于湿盒 4℃孵育过夜或 37℃孵育 1h-2h。

6.复温。4℃过夜后从冰箱拿出样本,在室温下孵育 15min 复温(抗体孵育为 4℃过夜选用此步骤,如室温孵育直接进入下一步清洗)。用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。

7.二抗孵育。吸水纸擦干切片后滴加 50μL 标记的羊抗兔 IgG(试剂 6),37℃孵育 20  分钟,用 PBS

缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。

8.三抗孵育。吸水纸擦干切片后滴加 50μL 辣根酶标记的链酶卵白素孵育(试剂 7),37℃孵育 20  分钟,用 PBS 缓冲液冲洗切片 5 分钟,重复三次。

9.显色。甩去 PBS 缓冲液,吸水纸擦干切片; 每张切片滴加新鲜配制的 DAB 工作液 50μL(试剂 8:试剂 9:试剂 1=1:1:18  比例配置),孵育 3-5min,光学显微镜下观察染色结果,切勿显色过深;显色后用自来水冲洗切片终止显色。

10.复染。滴加适量苏木素染液(试剂 10)复染,孵育 1-5 分钟,自来水冲洗 5 分钟,滴加盐酸酒精分化

液分化30秒,自来水冲洗。

11.脱水封片。将玻片依次置于 70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇、无水乙醇,各浸泡5分钟, 再将玻片放入二甲苯中浸泡 15 分钟,重复三次。玻片取出来稍晾干,用中性树胶封片。

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