公司产品仅用于科研产品属性：

自备仪器和用品：

酶标仪、离心机、移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水

粗酶液提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、 酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm。

2、 试剂三的稀释：将试剂三用蒸馏水稀释50倍，用多少配多少。（试剂三和蒸馏水1：49稀释。

3、 工作液配制：在试剂一加入100μl试剂二，充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。（若一次性测定样本较少，可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml：0.1ml的比例混匀配制）

4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解（溶解后一周内用完）。

5、 样本测定

注意事项

1、试剂三为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。

2、对照管只需要做一管。

3、SOD为什么有的样本测定管大于对照管，对照管数值在什么范围？

对照管的范围是0.4-1。对照管吸光值过低可能是（1）试剂三活性低，可以适当减少稀释倍数；（2)没有按顺序加试剂；（3）反应时间不够，可以延长反应时间（反应时间30min可以延长到40min）。对照管吸光值过高可能是试剂三未按操作说明书稀释相应倍数。

若出现测定管大于对照管，可能是样本中杂质的影响太大，为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测，通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

猪血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)试剂盒肌激（兔肌）L-亮氨酯盐盐 98%春雷霉素盐盐 分析标准品，95%

猪黑色素瘤转移表面黏附分子(MMSAM)试剂盒心肌黄D-赖氨盐盐 98%标准溶液100μg/ml,u=4%,溶剂:乙

猪黑色素瘤转移表面黏附分子(MMSAM)试剂盒G-6-P脱氢D-亮氨 99%标准溶液10μg/ml,u=4%,溶剂:乙

猪可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)试剂盒G-6-P脱氢N(e)-Boc-L-赖氨 97%乳氟禾草灵 分析标准品，74%

猪可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)试剂盒G-6-P脱氢亮抑酞 ≥90% (HPLC虱螨脲 分析标准品，99.5%

猪血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)试剂盒G-6-P脱氢L-亮氨苄酯对苯磺盐 98%紫精 分析标准品，99%

猪血管内皮钙粘着蛋白复合体(VE-cad)试剂盒磷葡萄糖异构D-亮氨酯盐盐 98%苯噻草 分析标准品，98.5%

猪去上腺素(NE)试剂盒磷葡萄糖变位D-亮氨苄酯对苯磺盐 98%磺隆 分析标准品，98%

猪去上腺素(NE)试剂盒磷葡萄糖变位Boc-Lys(Boc)-ONp 97%磺隆标准溶液 100μg/ml,u=2%,溶剂:

猪血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)试剂盒 蚯蚓Boc-Lys(Z)-OSu 98%磺隆标准溶液 10μg/ml,u=4%

猪血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)试剂盒 蚯蚓N-(叔丁氧羰)-D-赖氨  98%四聚乙 分析标准品，97%

猪凋亡相关因子(FAS/CD95)试剂盒 离析R-10N-[(9H-芴-9-氧)羰]-N'-[(2-烯氧)羰]-L-赖氨  95%异草 分析标准品，98.5%

猪凋亡相关因子(FAS/CD95)试剂盒 离析R-10N-芴氧羰-N'-[1-(4,4-二-2,6-二氧代环己亚)-3-霜灵 分析标准品，98%

猪B淋巴瘤因子2(Bcl-2)试剂盒离析R-10Z-丁氧羰赖氨 98%霜灵标准溶液 100μg/ml,u=5%

猪B淋巴瘤因子2(Bcl-2)试剂盒蜗牛H-Leu-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh霜灵标准溶液 10μg/ml,u=6%

猪Bcl-2相关X蛋白(BAX)试剂盒 蜗牛H-Lys(Boc)-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh氧虫酰肼 分析标准品，98%
胃蛋白酶试剂盒γ-氨吡啶

γ-乙吡啶

胞啶

苯并嘧啶

脱氧脲啶

二苯并吡啶

核糖胸腺嘧啶

氧苄氨嘧啶

邻二吡啶

操作步骤：

1. 样品的准备：

a. 细胞样品的准备：收集细胞，用4 ℃或冰浴预冷的PBS 或生理盐水洗涤1-2遍。沉淀用预冷组织细胞裂解液4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4℃离心，取上清作为待测样品。

b. 组织样品的准备：动物用生理盐水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素钠) 灌流清除血液后获取组织样品。按照每100mg加入500-1000ul组织细胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴匀浆( 可以使用玻璃匀浆器或各类常见电动匀浆器) 。随后匀浆液4 ℃离心，取上清作为待测样品。

c. 使用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。通常10-20ug蛋白的细胞或组织匀浆液样品中SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大，该活力范围仅作为初步的参考) 。每种样品准备20-100 ug蛋白量通常已经足够用于后续检测。

d. 根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量，用试剂盒提供的SOD检测缓冲液适当稀释样品。例如，小鼠肝脏通常需要稀释10-100 倍。准备好的样品如果当天测定，可以冰浴保存；如果当天不能完成测定，可以-70 ℃冻存，但建议尽量当天完成测定。

2. 试剂盒的准备工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 参照下表，根据待检测样品(包括标准品) 数量，配制适量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。

注意：由于酶溶液的用量较少且易沉降，必须注意在使用前先轻轻离心一下，然后适当混匀后再使用。

b. 反应启动工作液配制：将试剂盒提供的反应启动液 (40X) 溶解后混匀，按1μl 反应启动液(40X) 加入39μl SOD 检测缓冲液的比例进行稀释，即为反应启动工作液。4℃或冰浴保存，可当天使用，但建议尽量现配现用。

c. (可选做) SOD 标准品准备：需自备SOD标准品，用本试剂盒提供的稀释液将SOD标准品稀释至如下系列浓度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在随后的检测中可以各取20微升，参考样品进行检测。说明：为避免稀释后SOD酶活性的下降， SOD标准品宜现稀释现使用；本试剂盒对于SOD的检测并不需要SOD作为标准品，但可以使用SOD标准品作为阳性对照或作为对SOD活性定量的参考。

3. 样品测定：

a. 参考下表使用96孔板加入各个组分，注意设置样品孔和各种空白对照孔。

注意：加入反应启动工作液后反应即会开始，可以在低温操作或用排枪操作以减小各孔间因加入反应启动工作液的时间先后差异而导致的误差。

b. 37℃孵育30分钟。

说明：孵育25至35分钟检测出来的SOD活力无显著差异，但为保证检测结果的一致性，推荐孵育30分钟。

c. 450nm 测定吸光度。如无450nm 滤光片，可以使用420-480nm 的滤光片。也可以使用大于600nm 的波长作为参考波长进行双波长测定。

4. 样品中总SOD活力的计算：

a. 抑制百分率的计算：

参考如下计算公式计算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白对照1－A空白对照2)－(A样品－A空白对照3)] / (A空白对照1－A空白对照2) × 100%

如果没有设置空白对照3，则可以把计算公式简化为：

抑制百分率＝(A空白对照1－A样品) / (A空白对照1－A空白对照2) × 100%

如果计算出来的抑制百分率小于30% 或大于70% ，则通常需要把该样品重新测定。尽量使样品的抑制百分率在30-70%范围内。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样品；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度较高的待测样品。

b. SOD酶活力单位的定义：在上述化酶藕联反应体系中抑制百分率为50% 时，反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位 (unit)。注意：SOD的活力单位的定义方式有很多种，不同的活力单位需根据其定义的不同进行适当换算。