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1. 收集4ml待提取的培养基样品,置2-8℃保存。
2. 将样品在4℃条件下,3000×g离心15分钟。弃沉淀,收集上清。
3. 小心将上清移入另一干净离心管中。
4. 将样品在4℃条件下,10000×g离心20分钟。弃沉淀,收集上清。
5. 小心将上清移入另一干净离心管中。
6. 在4 ml上清中加入1 ml提取液A,盖紧离心管盖,上下颠倒混匀1分钟左右,使液体充分混匀。
7. 置2-8℃冰箱静置过夜。
8. 在4℃条件下,10000×g离心60分钟。
9. 小心移除上清,收集沉淀。
10. 取50-100 μl外泌体保存液将沉淀重悬,即得到外泌体样品。
11. 将外泌体样本-80℃保存或直接用于下游应用。