DII(细胞膜橙红色荧光探针)41085-99-8的使用方法
时间:2021-04-29 阅读:885
细胞膜荧光探针染料DiD,DiI,DiO和DiR是一类亲脂性荧光染料家族,用于标记细胞膜等脂溶性生物结构和疏水性组织。这是一类环境敏感型荧光染料,当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质,虽然在水中其荧光强度很弱)结合时,其荧光强度显著增强。它们具有很高的淬灭系数,偏光依赖性和很短的激发寿命。一旦应用于细胞中,这种染料会在细胞内质膜中逐步扩散,导致在其最佳浓度条件下,将整个细胞膜染色。它们不同的荧光颜色:DiI(橙色荧光)、DiO(绿色荧光)、DiD(红色荧光)、DiR(深红色荧光),为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。
DII(细胞膜橙红色荧光探针)即DiIC18(3),可以使用标准的TRITC滤光器。DiI比DiO更亮。DiI通常不会影响细胞的生存力,因此被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-termtracer)。被DiI标记的神经细胞在体外培养的条件下可以存活长达4周,在体内可以长达一年。DiI在经过固定的神经元细胞膜上的迁移速率为0.2-0.6mm/day,在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为6mm/day。DiI除了简单的细胞膜荧光标记外,还可以用于检测细胞的融合和粘附,检测发育或移植过程中细胞迁移,通过FRAP检测脂在细胞膜上的扩散,检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
英文名称:DiIC18(3)
DiI perchlorate
1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate
中文名称:DiI(细胞膜红色荧光探针)
1,1'-双十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐
CAS 号:41085-99-8
分子式:C59H97ClN2O4
分子量:933.86500
Ex/Em:550/567 nm
外 观:红色至暗红色,紫色至深紫色粉末
纯 度:≥95%
溶解性:溶于DMF,DMSO,甲醇
厂 家:陕西新研博美生物科技有限公司
请点击此处进入陕西新研博美生物科技有限公司展台查看
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结构式:
DiIC18(3) 结构式
应用实测:
本品配成5mM溶液后为紫粉色液体溶液,澄清且无可见异物;进
行荧光染色检测:工作条件:荧光显微镜,C6细胞,400×,工作浓度5μM。
结果:经细胞膜荧光染色,在40倍物镜下可看到清晰橙红色荧光。
厂 家:陕西新研博美生物科技有限公司
操作方法
1.染色液制备
(1)配置DMSO或EtOH储存液:储存液用DMSO或EtOH配置浓度1~5mM。【注】未使用的储存液分装储存在-20℃,避免反复冻融。
(2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储存液,配制浓度为1~5μM的工作液。
【注】工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始*浓度的摸索。
2.悬浮细胞染色
(1)加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为1×106/mL。
(2)37℃孵育细胞2~20min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
(3)孵育结束,按1000~1500rpm离心5min。
(4)倾倒上清液,再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
(5)重复(3),(4)步骤两次以上。
3.贴壁细胞的染色
(1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
(2)从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)37℃孵育细胞2~20min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。(5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10min,然后吸干培养基。
4.显微镜检测DiD,DiO,DiI,DiR选择合适的滤光器观察。
5.流式细胞仪检测经DiD,DiO,DiI,DiR染色的细胞可分别用流式细胞仪的FL1,FL2,FL3或FL4通道检测。