D-萤光素 (D-Luciferin) 是荧光素酶的常用底物。D-萤光素利用荧光素酶报告基因在活体内表达产生的荧光蛋白发生化学反应产生荧光，从而使用高灵敏度的光学检测仪器检测动物活体体内的细胞活动和基因行为，普遍应用于生物领域，特别是生物活体成像技术。

问题答疑

Q:D-荧光素钾盐与D-荧光素钠盐、D-荧光素的区别

A:D-荧光素钾盐、D-荧光素钠盐以及D-荧光素的主要区别体现在它们的溶解和分散性能上。D-荧光素是游离态，D-荧光素钠盐和D-荧光素钾盐是盐形式，游离态的D-荧光素难溶于水，需要酸碱进行助溶，难以应用于生物活体，盐形式更易溶于水，能满足实验剂量需求。与荧光素钠盐相比，D-荧光素钾盐在水和缓冲液中的溶解度较高，且溶解速度较快，因此在一般的生物学试验中，D-荧光素钾盐常被选用。

Q:D-荧光素钾盐的适用场景

A:D-荧光素钾盐作为活体成像底物，活体体内稳定表达荧光素酶是D-荧光素钾盐作为活体成像底物应用的关键前提。只有在荧光素酶存在并稳定表达的情况下，D-荧光素钾盐才能发挥其在活体成像中的重要作用。

D-荧光素钾盐可以做细胞实验，且无需裂解液。D-荧光素钾盐本身是粉末，成分单一，不包含裂解成分。D-荧光素钾盐具有出色的水溶性和脂溶性，这使其能够轻松穿透细胞膜和血脑屏障这一特性使得D-荧光素钾盐能够迅速进入细胞内部，与细胞内的荧光素酶发生反应，从而产生明亮的发光信号。

D-荧光素钾盐可以用于干细胞示踪的活体成像，

干细胞标记主要有两种形式：

a. 慢病毒标记神经干细胞。慢病毒标记神经干细胞是一种常见的标记手段，通过将荧光蛋白基因整合到慢病毒载体中，并感染神经干细胞，可以使干细胞表达荧光蛋白。

b. 可标记组成性表达的基因，做成转基因小鼠，从该小鼠的骨髓取出已标记的造血干细胞。

在这种方法中，研究者将荧光蛋白基因插入到小鼠的基因组中，使其在小鼠的所有细胞中组成性表达。从这种转基因小鼠的骨髓中取出的造血干细胞自然携带荧光蛋白标记。