NucleofectorTM技术是一种有效的、非病毒介导的、用于原代细胞与难转细胞系的转染方法。

NucleofectorTM技术是一种基于通过施加电脉冲在细胞膜中瞬间产生小孔，综合各种NucleofectorTM程序和细胞类型特异性电转试剂，使核酸底物不仅可以输送到细胞质，还可以通过核膜进入细胞核。这使得细胞最高转染效率可达99%，并使转染成功不依赖于细胞的增殖分裂。

NucleofectorTM技术-非病毒介导的方法

图 1. 使用传统电穿孔和核转染法转染NK细胞系 NKL

用 2.5ug pmaxGFP载体转染5x106NKL 细胞。核转染：Nucleofector Solution V；程序 0-017。竞争对手B电穿孔：25 mV，96μF。24小时后通过流式细胞仪监测转染效率。与通过传统电穿孔转染的细胞相比，通过 Nucleofection 转染的细胞显示出明显更好的转染效率。在转染后 18 小时测量的细胞活力也优于使用 Nucleofection。

DNA递送进入细胞核

图 2. 用 2.5ug TMR 标记的质粒DNA的编码eGFP转染正常人真皮成纤维细胞（新生儿）。2 小时后，用 3.5% PFA 固定细胞并通过共聚焦显微镜进行分析。TMR 标记显示在 (A) 中，GFP 荧光显示在 (B)，DAPI 核染色显示在 (C) 中，所有三个荧光标记的合并显示在 (D)。

NucleofectorTM技术的组成

Nucleofector技术由Nucleofector仪器、细胞特异性的缓冲液和操作手册组成。

仪器∶内置针对各种细胞优化好的电脉冲程序，程序可在仪器触摸屏上直接选择。Lonza提供了不同功能模块平台，可供大家选择（X模块，Y模块，96孔模块，LV模块及384孔模块）。

试剂盒∶试剂盒是包含有细胞特异性缓冲液，补充剂，专用电极耗材，pmaxGFPIM阳性质粒等。细胞特异性缓冲液和补充剂为细胞转染提供保护，既保证了高转染效率与细胞活率，又帮助细胞维持良好的生理功能性状。我们提供有一系列的优化转染试剂盒与操作手册。

数据库与操作手册，在我们的数据库中为大家提供600种以上细胞的转染数据和操作手册。优化的操作手册除了操作指导外，还包括细胞来源、传代、生长条件、培养基以及转染后培养等细节技巧。

4D NucleofectorTM 系统提供更加灵活的多模块

兼容性的模块：X模块

针对不同数量级的细胞，提供不同的电极耗材。X模块可以使用两种不同形式的聚合材料电极，分别是如下电极杯与电极板条。

*左图为100uL电极杯；右图为16-well 20uL电极板条

100uL电极杯

低通量但一次可转大量细胞（适用于生化应用或Western Blots）

16-well 20uL电极板条

中通量，低细胞数量（报告基因分析，RNAi）

贴壁转染模块：Y模块

至今为止，基于电转的方法都是要求细胞处于悬浮状态，NucleofectorTM进入一个新时代，细胞可以在贴壁状态下直接转染。维持细胞在贴壁生长生理状态下完成转染实验。细胞培养在24孔板上，插入电极板即可完成转染。

-转染前与转染后都可在24孔板中

-可在细胞生长的任何时期进行转染

-成活率高，转染高可达75%

-与CloneticsTM原代动物神经元兼容

中通量转染模块：96孔模块

96-well模块为一系列原代细胞和细胞系提供灵活的通量以及经济的处理体系、快速和预先优化的方案。它是4D-Nucleofector设备的中等通量扩展，适用于便捷地优化核转染条件或作为筛选（CRISPR screening，TCR screen-ing）的一种工具。

-每块板最多可运行96个独立程序，在5分钟内自动处理

-模块化6×16 Nucleocuvette板可实现可扩展的通量

-可无缝集成到自动化液体处理系统中

-只需1个板即可优化任何难以转染的细胞

-每个反应的细胞数为104-105个细胞

高通量转染模块：384-well系统

384-well Nucleofector系统是一个独立的平台，用于384 孔的高通量核转染。凭借一分钟的极短的处理时间和高重现性，使它成为筛选应用的理想工具。此外，Nucleofector溶液中的细胞储存时间被缩至最短，所有现有的96孔Nucleofector方案无需进一步优化即可使用。

快速高效助力筛选

●在一分钟内处理一个384孔板

高性能与低材料消耗相结合

●转染细胞数可低至2×104个细胞

易于使用和自动化的系统

●使用现有的96孔NucleofectorTM实验方案

●由直观的PC软件操作

●无缝集成到自动化液体处理系统中

大体积转染模块：LV模块

4D-NucleofectorLV单元，将我们经验证的4D-Nucleofector系统扩展到更大规模的转染范围。

LV单元可以对1×107至1×109个细胞范围内对人原代细胞进行封闭、可扩展的体外修饰。可以利用X单元以较小的规模建立转染方案，随后将其转移到LV单元，而无需重新优化或少量的优化。它支持多种应用，如CAR-T细胞生成、CRISPR 基因组编辑，便于快速将研究成果转化为符合GMP的细胞疗法生产过程。

-封闭的系统-核转染细胞数量多达109个

-规模可真正放大-以少量样品建立方法

-成熟的转染方案-超过700多个优化细胞类型

-操作简单-极少的培训需求

-4D-NucleofectorTMLogWare-可使用符合21CFR part 11 的软件进行操作

-TheraPEAKTM NucleofectorTM耗材-加快满足GMP过程要求的进度

两种体系可用于科研或GMP用途

*左图为1ml电转盒，最多可容纳 1x 108细胞（通过无菌注射端口手动填充）；右图为20ml电转盒，处理量高达 20mL（每次1ml），最多可容纳 1x 109 个细胞（通过储液罐或袋子自动填充）

符合21CFR Part 11合规性软件∶4D-NucleofectorTMLogware

对于4D-NucleofectorTM系统，龙沙提供的附件产品可为上游GMP制造环境中的转染应用提供更高的质量标准。

-符合Title21CFRPart11/annex11

-用户管理

-带有用户名和密码的电子签名

-使用时间戳记录任何修改、数据创建或用户交互

-使用失败描述报告结果失败

-根据Title21CFRPart11导出数据

-生成审计跟踪

-无法删除数据