Oxoid抗微生物药物敏感性试验纸片操作流程

操作流程：

提供的材料：Oxoid抗微生物药物敏感性试验纸片。

需要但没有提供的材料：用适当培养基制成的琼脂平板、接种用的混悬培养基、无菌接种环和拭子、无菌镊子、麦氏浊度标准液、培养箱、改良的气体环境、抗生素纸片分配器、质控菌种、测量抑菌环大小的装置和当地标准方法的判读标准。

方法：Oxoid药敏纸片可能会与各种标准检测方法一起使用，包括但不限于BSAC、CDS、DIN、CLSI M2或EUCAST，请参见现行的当地指南，查找特定信息，如推荐的培养基、接种物浓度水平和培养条件等。

质控程序：建议以适当的间隔检测质控菌株，可以在每次做试验时进行，也可以根据国家标准机构提供的抗生素敏感性检测指南推荐的程序。如果质控微生物对特定抗生素的检查结果在规定的范围以外，不得报告患者的检查结果，并不得使用该药敏纸片，直至确定了产生这种不一致结果的原因（例如培养基、灌装量、接种物、培养条件、质控菌株或者药敏纸片储存或使用不正确）。

限制：本产品供体外诊断使用，仅用于指示供试微生物的体内敏感性。选择何种抗微生物药物进行测试和报告必须由每个临床实验室来决定。临床医生负责决定使用何种抗生素对抗供试微生物，同时应考虑可能影响药物体内活性的其它因素。

临床实验室标准化协会（CLSI）方法小结（其它标准有所不同）：培养基：Mueller-Hinton琼脂用于检测非苛养微生物。Mueller-Hinton加5%绵羊血用于检测脑膜炎奈瑟氏菌和链球菌，GC琼脂加1%规定的生长添加剂用于检测淋病奈瑟氏菌。嗜血杆菌检测培养基用于检测流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌。其它苛养菌或很少检测的细菌所用的培养基和检测条件可在CLSI M45中找到。平板和药敏纸片在使用前要在室温下平衡。平板在接种细菌前不应太潮湿。

供试微生物：采取适当的检测方法来核实供试微生物的推测鉴定结果。采用直接菌落法或生长法制备标准化的接种物并在制备好的15分钟内接种到平板上：生长法－用接种环蘸取3至5个形态上相似的菌落，并将其转移到4-5 ml的胰蛋白胨大豆肉汤或

类似培养基中。在35℃下培养2-6小时。用无菌盐水或肉汤调整浊度，使浊度等于0.5 麦氏浊度标准（制备0.5 麦氏浊度标准液：将0.5 ml的0.048M 氯化钡[1.175% 重量/体积 BaCl₂ ·2H₂O]加入99.5 ml 0.18 mol/l硫酸[1% 体积/体积]中－将这一标准液置于暗处）。直接菌落法（葡萄球菌和链球菌的方法）－从非选择性琼脂上挑取分离的菌落，加入无菌盐水或肉汤中，并制成等于0.5 麦氏浊度标准的菌悬液。

接种：将无菌拭子浸入菌悬液中，对着试管壁旋转按压，挤出多余的液体。沿着至少三个方向涂布平板表面。应在接种的15分钟内将药敏纸片放到平板上。

药敏纸片：使用前要将药敏纸片放置于室温下。每块平板推荐的试验药敏纸片数量如下：

在贴上药敏纸片的15分钟内翻转平板，并按照下面的规定培养

*葡萄球菌和肠球菌需要培养24小时。耐甲氧西林的葡萄球菌可能在温度超过35℃的条件下检测不出来。

判读：培养后，测量细菌生长*抑制区域的直径，到mm。抑菌环的边缘应为肉眼可以发现的无明显微生物生长的区域。血平板的结果利用反射光从平板的上表面读取（不用读取溶血环的边缘，而是细菌生长的边缘）。所有其它培养基要使用黑色背景和反射光从平板的背面判读（葡萄球菌和肠球菌除外，它们采用投射光读取－有微弱的生长表明有耐药性）。如果是变形杆菌，忽略在明显的抑菌环上生长的一层薄薄菌膜。对结果进行判读的完整说明可依照CLSI方法，请参考现行的CLSI M100标准。下表只详细说明了在CLSI标准中的那些药物/浓度。与其它标准方法一起使用的其它药物和浓度可从Oxoid获得，但没有在本说明书中详细列出。

*部分摘自CLSI文件M100-S20（M02-A10）：“药敏纸片扩散法补充表”抗微生物药物敏感性试验性能标准。可从临床和实验室标准化协会（940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19807）获得完整的标准。