Morris水迷宫( Morris water maze，MWM) 是用 于研究啮齿类动物学习记忆的经典行为学实验方 法。在用于学习记忆机制、药物对学习记忆的改善、评价疾病模型等研究时，实验学者多采用测试期的逃避潜伏期平均数差别是否具有统计学意义来评价模型是否成功或药物是否起到作用，而缺乏实验过程中小鼠学习规律的系统性研究与评价。且不同实验室对实验动物每天训练次数及总训练时程各不同一，使得在进行各实验室实验结果对比和评价时，会影响各实验结果间的比较和实验参考价值，使实验质量和实验效率降低。基于目 前水迷宫实验存在的问题，本实验采用文献报道较多的每天训练2次、3次两种不同的训练方式，考 察不同训练方式对小鼠学习记忆成绩的影响，分析实验过程中小鼠学习成绩变化规律，并得出不同训练方式下小鼠的最佳训练时程。

01
实验设备

XR-XM101型 Morris水迷宫视频跟踪分析系统，上海欣软信息科技有限公司。包括 XR-XM101型Morris水迷宫和VisuTrack动物行为分析软件：水迷宫圆形水池(D=120cm，h=30cm) ；平台(D= 9cm，h=15cm) 。

Tip：Morris水迷宫测试是需要使用的染料可以是黑色/白色的食用色素，也可以是二氧化钛，不建议使用墨水或者牛奶，牛奶成本高且容易变质发臭，墨水本身有气味，容易应激。

02
经典实验方法

• 适应性训练

正式实验前一天，不放置平台，让小鼠自由游 泳120s。训练完毕后立即取出小鼠并擦干以避免应激反应。

• 定位航行实验

实验前，将不同标记物分别贴在4个象限。平台在水面以下1cm 处，水温控制在( 20.0±2) ℃，并 用二氧化钛将水染成乳白色。实验时将小鼠在除目标象限(平台所在象限) 之外的三个象限随机面对池壁放入水中，当小鼠找到平台后，记录潜伏期，并 在平台上停留30s; 如果小鼠在120s内未找到平台，潜伏期记为120s，并引导小鼠在平台上停留30s，让其根据四个象限的参照物进行空间学习记忆。每次训练完成后将小鼠立即取出并擦干以避免应激反应。记录小鼠的游泳速度，逃避潜伏期、外环滞留时间百分比，目标象限滞留时间百分比等指标。

2次/d 组于每天10 点、14点对实验小鼠进行 定位航行实验;3次/d 组于每天8点、12点、16点对实验小鼠进行定位航行实验。

03
实验结果

• 游泳速度变化

组内游泳速度比较：同一训练次数下，2 次/d 组和3 次/d 组不同 批次小鼠间的游泳速度比较均无统计学差异( P＞ 0．05) ，如图见。

两组游泳速度比较：由于每组不同批次小鼠之间的游泳速度无统计学差异，因此将每组的三批实验数据分别合并为大数据进行统计分析。同一训练次数下，2 次/d、3 次/d 组小鼠游泳速度比较无统计学差异( P＞0.05) 。说明两组小鼠的体力没有差别，并且随着训练次数的增加小鼠的游泳速度也无明显的变化，如图。

• 外环滞留时间百分比比较

组内外环滞留时间百分比比较：同一训练次数下，2 次/d 组和 3 次/d 组不同批次小鼠间的外环滞留时间百分比比较均无统计学差异( P＞0.05) ，如图。

两组外环滞留时间百分比比较：由于两组不同批次小鼠间的外环滞留时间百分比无统计学差异，因此分别将每组的三批实验数据合并成大数据进行统计分析。同一训练次数下，2次/d、3次/d 组小鼠的外环滞留时间百分比比 较无统计学差异( P＞0.05) 。与自身第1次外环滞留时间百分比相比，2次/d 组和 3次/d 组小鼠 分别在第 3 次和第4次开始出现统计学差异( P＜ 0.05) ，并分别从第3次和第4次开始趋于稳定，如图。

04
记录要点

在MWM实验中，小鼠可通过一定时程的多次 训练而获得对空间的认知。但目前训练方式、总训练时程对训练有无影响以及选取哪种训练方式缺乏相应的实验依据。查阅文献发现有每天训练1次、5天共5次，每天训练2次、4天共8次，每天训练3次、5天共15次，每天训练4次、4 天共16次，每天8次、2 天共 16次等，其中应用较多的是每天训练2次或3次、总训练次数15次。因此本文选择每天训练2、3次、总训练次数15次进行定位航行实验，以游泳速度判断 各组及各批次小鼠学习成绩的差异非体力及速度 差异所致; 以逃避潜伏期并辅以外环滞留时间百分比及目标象限滞留时间百分比进行学习成绩判定。 结果显示连续15次训练完成后，同一训练次数下， 2 次/d 组和 3次/d 组小鼠相比各指标均无统计学差异; 每组不同批次小鼠间各指标均无统计学差异。说明两种训练方式小鼠学习成绩没有明显差别，且本实验选择的两种训练方式具有良好的重现性，因此建议根据实验具体情况选择每天训练 2次或3次均可。