EPI400 感受态细胞

EPI400 Chemically Competent Cell



EPI400 感受态细胞基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

EPI400 感受态细胞简要说明：
EPI400 来源于 EC100 菌株，将 EC100 核基因中控制质粒拷贝数的 pcnB 基因删除后引入一个诱导启动子 驱动的 pcnB 基因,即是 EPI100 菌株。EPI400 菌株可以降低质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆，在加入诱导剂- CopyCutter Induction Solution 后又可以提高质粒产量到正常状 态。[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使 EPI400 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA 。recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。lacZΔM15 标记的存在 使 EPI400 可用于蓝白斑筛选，tonA 赋予其抗噬菌体 T1 和 T5 的能力，rpsL 赋予其链霉素抗性。EPI400 感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率可达 5×107 cfu/μg DNA。

EPI400 感受态细胞操作说明：
1. EPI400 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分钟后待菌块融化，加入目的 DNA（质粒或连接 产物）并用手 EP 管底混匀，冰中静置 25 分钟。
2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入 700 μl 不含抗生素的无菌培养基 (2YT 或 LB)，混匀后 37℃，200 rpm 复苏 60 分 钟。
4. 5000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或
1.LB 培养基上。
5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 15 h。


EPI400 感受态细胞注意事项：

2.  感受态细胞在冰上融化。
3. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。