病理组织包埋染色俗称HE 染色法为苏木精-伊红染色法，是石蜡切片技术里常用的染色法之一，也是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中基础、广泛的技术方法。

　　属性为碱性的苏木素染色液可以使细胞着蓝色，为酸性的伊红使细胞着红色，其结果胞核呈蓝色，胞浆呈红色。两种不同的染色液使细胞通过颜色来改变折光率，在光镜下呈现出细胞图像。

　　病理组织包埋染色之所以成为细胞染色常用的方法是因为HE染色法过程中除化学反应外，还有物理作用中吸附、吸收效果，使HE染色提供良好的核浆对比染色效果。

　　若细胞用4％多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色12-15min，伊红5min即可。

　　6、培养瓶、培养皿、镊子、盖玻片、载玻片、显微镜。

　　病理组织包埋染色常见规格为310ml和3100lm。

    　2、苏木精溶液染色：

　　(5)蒸馏水过洗 5 s 

　　(2) 蒸馏水稍洗 30 s

　　(8)中性树胶封固

　　着色深浅与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。

病理组织包埋染色全组织包埋免疫荧光染色

　　另取5只小鼠经水合氯醛麻醉后，建立跨区耳瓣模型，方法同前。在建模后第3天处死小鼠，脱毛液尽量去除小鼠耳部毛发，将耳瓣侧耳部剪下，利用生理盐水洗净，在光学放大体式显微镜下使用剪刀和镊子进一步去除毛发。接着按照以下步骤进行组织处理：（1）将剪下的小鼠耳放入装有甲醇的EP管中，沉至管底，-20 ℃保存至少30 min；（2）取出鼠耳，放入装有Hanks平衡盐液的培养皿中，在体式显微镜下利用镊子缓慢分离，将耳组织分为前层皮肤、软骨及后层皮肤，将分离出的前层皮肤放入装有4%的多聚甲醛的EP管中，4 ℃固定1 h直至组织沉淀至管底；（3）取出前层皮肤，放入1×PBS中洗涤3次，每次5 min；（4）取出洗涤后的前层皮肤，置于装有1×PBS缓冲液的培养皿中，在光学放大体式显微镜下使用剪刀和镊子剔除多余的脂肪结缔组织，进行精修。

　　对建立跨区耳瓣模型第3 d的鼠耳进行全组织包埋免疫荧光染色，观察跨区耳瓣模型建立3 d后，跨区耳瓣choke区域小血管及毛细血管的管径大小，末梢神经走行以及与血管再生相关的单核巨噬细胞［4］分布情况。CD31与α-SMA抗体分别对血管内皮与血管平滑肌进行染色，利用Tuj1及α-SMA对轴突与血管分别进行标志，利用CD68抗体进行单核巨噬细胞染色。具体操作步骤如下：（1）制备封闭液（简称10%HIGS），将10 ml山羊血清、0.2 ml曲拉通X-100溶于100 ml磷酸盐缓冲液中,并应用0.45 μm的滤器对配成的溶液进行滤过。（2）在室温条件下，将处理完的鼠耳前层皮肤放入装有1 ml 10% HISG的24孔板中，摇床辅助孵育30 min。（3）制备一抗溶液，使用10%HIGS稀释一抗，稀释比例1∶500。将CD31、CD68、α-SMA、Tuj1一抗同时稀释混合使用，孵育时间较长时可加入0.2%抑菌防腐。（4）将经孵育的皮肤取出放入新孔或用滴管吸除10%HIGS溶液后，加入150 μm一抗溶液，4 ℃摇床孵育过夜，第2天将皮肤转移至新孔洞或用滴管吸除原有溶液，加入1 ml 2%HIGS溶液，室温下摇床洗脱一抗3次，每次15 min，每次洗脱更换液体。（5）制备二抗溶液，使用10%HIGS稀释二抗，稀释比例1∶500，将CD31、CD68、α-SMA、Tuj1二抗同时稀释混合使用，通过0.22 μm的生物滤膜对配成的液体进行过滤。13 000 g离心二抗溶液，离心5 min。（6）将洗脱后的皮肤取出，放入新孔洞或用滴管吸除原有溶液，加入150 μm二抗溶液，室温下摇床孵育1 h，避光。（7）取出皮肤，将皮肤转移至新孔洞，加入1 ml 2%HIGS溶液。室温下，摇床洗脱二抗3次，每次15 min，每次洗脱更换液体。（8）取出皮肤，转移至新孔洞，加入150 μm DAPI (1∶1000) 溶液染色，孵育10 min。（9）取出皮肤，转移至新孔洞，加入1 ml 2%HIGS溶液。室温下，摇床洗脱3次，每次15 min，每次洗脱更换液体。（10）把组织样本放入载玻片上铺平，滴加1滴荧光封片剂，封盖盖玻片,放于室温过夜，待荧光封片剂凝固，于共聚焦激光显微镜下扫描观察。

此产品只用于科研，不作用于人体

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