奥浦迈OPM-293 CD05化学成分确定的培养基
时间:2024-08-27 阅读:48
OPM-293 CD05 是完(空)全化学成分确定(Chemically-defined)的培养基,不含水解物、蛋白、生长因子及任 何动物来源的成分,适合于各种亚型 HEK293 细胞的高密度培养及高效率瞬时转染。
订购信息:
基础培养基
产品 | 产品号 | 类型 | 规格 | 描述 |
OPM-293 CD05 Medium | 81075-001 | 液体 | 1000mL | 含L-Glutamine |
OPM-293 CD05 DPM | P688293 | 干粉 | 10L/50L/100L | 含 L-Glutamine |
补料培养基
产品 | 产品号 | 类型 | 规格 | 描述 |
OPM-293 ProFeed | F081918 | 液体 | 100mL | 无蛋白补料 |
F081918-001 | 液体 | 1000mL |
其他 HEK293 系列培养基
产品 | 产品号 | 类型 | 规格 | 描述 |
OPM-293 CD03 DPM | 91070-010 | 干粉 | 10 | 不含 L-Glutamine |
91070-050 | 干粉 | 50L | ||
OPM-293 CD03 Medium | 81070-001 | 液体 | 1000mL | 不含 L-Glutamine |
OPM-CD Trans293 | P82019 | 液体 | 1000mL | 含 L-Glutamine |
应用范围
OPM-293 CD05 即适用于科研应用,也适用于基于细胞培养的大规模生物药生产,但不可直接用于人体或作为药 物使用。
储存运输方法
储存:2~8℃冷藏,干燥避光保存
运输:常温(液体)、冷藏(干粉)
液体培养基配制方法
1. 取洁净的配制容器,建议一次性配制体积不低于 1L;
2. 加入最终配制体积 90%的超纯水或注射用水,水温控制在 25~35°C;
3. 称量 19.86g/L 干粉培养基,缓慢加入水中搅拌 10 分钟;
4. 称量 2.22g/L 碳酸氢钠,加入水中搅拌;
5. 缓慢加入 5N NaOH 调节 pH 到 8.3~8.5,搅拌 30 分钟,此时应完(空)全溶解;
6. 缓慢加入 5N HCl 将 pH 调回至 7.0;
7. 定容到最终配液体积,继续搅拌 5 分钟,测 pH,用 5N NaOH 或 5N HCl 将 pH 调回至 7.0;
8. 取样测渗透压,加入 NaCl 调节渗透压至 275±10mOsm/kg(渗透压计算公式:NaCl 添加量(g)=配液体积 (L)*(275-检测值)/31.5);
9. 继续搅拌 10 分钟,无菌过滤到合适容器,2~8℃避光保存。
干粉及液体培养基质量指标
培养条件
温度 37℃,湿度 80%,5~8%CO2
摇床设置:转速 115~125rpm(振幅 50mm)
细胞复苏
1. 在 37℃水浴中快速(<2min)融化冷冻的细胞;
2. 将冷冻管中的细胞液全部转移到含有 30mL 预温过的 OPM-293 CD05 培养基的 125mL 摇瓶中;
3. 放入 37℃,5~8% CO2,转速 115~135rpm(振幅 50mm),湿度 80%的摇床中培养
细胞传代
1. 将 OPM-293 CD05 培养基放入 37℃条件下预热 20-30min。
2. 取细胞密度≥3×10 6 ~ 4×10 6cells/mL、活率≥95%、处于对数生长期中期的细胞进行传代;注意:不同类 型的 HEK293 细胞可能具有不同的对数生长期范围。
3. 按接种密度为 0.3×10 6 ~ 0.6×10 6cells/mL。
4. 无菌转移所需量的种子液至合适体积的摇瓶中,并添加所需体积的已预热的 OPM-293 CD05 培养基。
5. 将摇瓶放入温度 37℃,湿度 80%,转速 110-150rpm(振幅 50mm),5%~8%CO2的细胞培养摇床中进行培养。 *每 2~3 天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。
细胞驯化
直接接种法
1. 对于可以直接驯化的细胞,可以从无血清培养基中直接接种到 OPM-293 CD05 培养基中,接种密度参考传 代步骤。
2. 继续传代细胞,直到细胞稳定生长。
3. 传代几代之后,细胞密度在接种的 3~4 天内达到 3×10 6cells/mL、细胞活性≥95%。此时,可以认为细胞 已被驯化成功。
梯度驯化法
1. 如果直接驯化效果不佳,请尝试按照以下梯度驯化表格进行操作。
2. 选择低代次的细胞,并确保细胞处于对数期。
3. 使用原始培养基培养细胞,并继续使用原始培养基传代 2~3 代,以实现稳定的细胞生长。
4. 在完(空)全使用 OPM-293 CD05 培养基接种 3~4 天之后,VCD 应该稳定达到 3×10 6cells/mL,细胞活性≥95%。 此时,细胞已经驯化到 OPM-293 CD05 培养基中。
转染和瞬时表达
转染条件应根据具体情况进行优化,可能需要通过 DOE 方法确定。以下转染条件仅供参考
推荐的补料添加方案
推荐转染流程
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