无血清哺乳动物细胞培养基为什么普遍要添加胰岛素
时间:2024-10-12 阅读:84
胰岛素是由胰岛β细胞分泌的一种多肽激素。胰岛素在许多细胞活动中发挥重要作用:如促进糖和氨基酸转运,提高合成代谢降低分解代谢,刺激细胞生长等。重组人胰岛素(rhInsulin)系由含有高效表达人胰岛素基因的酵母表达系统经发酵、分离和高度纯化后经冻干制成。由两条多肽链组成,每条多肽链由51个氨基酸残基组成多肽链,分子量为5807Da。
胰岛素是无血清哺乳动物细胞培养基中的普遍添加物质,上海惠诚生物提供的重组人胰岛素Recombinant Insulin(Cat NO.:GMP-045)属于GMP级别,可提供g级和kg级包装。
胰岛素在细胞培养时的作用
胰岛素作用广泛,包括调节脂肪和蛋白质的代谢以及促进细胞生长等。胰岛素功能的发挥源于其对细胞的作用,进而引起组织乃至机体的整体反应。一般可将胰岛素在细胞水平的作用分为三大类:代谢作用、促生长作用、以及代谢和促生长混合作用。
胰岛素在哺乳动物细胞培养中的作用主要是通过结合和激活IGF-1R。胰岛素和相关的胰岛素样生长因子IGF-i和IGF-ii通过结合胰岛素受体(IR)和1型IGF受体(IGF-1r)作用于细胞,在哺乳动物细胞表面表达。胰岛素只有在生理浓度下才能激活IR;高浓度的胰岛素通过IGF-1R触发有丝分裂效应,并通过天然IR导致各种效应。胰岛素通常以每升1到10mg的浓度添加到细胞培养基中,这大约是生理浓度的100倍。
从生理上讲,胰岛素的作用主要是代谢,而IGF主要是生长因子。重组胰岛素以大约100倍的生理浓度添加到哺乳动物细胞培养物中,作为生长因子,具有抗凋亡和有丝分裂作用。
在无血清细胞培养液中,常添加胰岛素来维持细胞生长,调节细胞对葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的摄取、利用和贮存,同时抑制糖原、蛋白质和脂肪的分解。
使用说明:
建议将冻干重组人胰岛素溶解在无菌0.01M盐酸中,浓度不低于1mg/ml,以待进一步稀释至工作浓度。尽可能避免反复冻融。 复溶后的重组人胰岛素:4℃可稳定储存7-10天;长期保存请分装后存放于-80℃。
胰岛素产品优势如下:
1)GMP级生产管理规范
2)技术全线技术支持
3) 无血清无动物源级别
4) 纯度高\生物活性高
5) 蛋白含量经过检测验证
6)监控内毒素
胰岛素在体外培养细胞的作用:
胰岛素在许多细胞活动中发挥重要作用,是哺乳动物细胞培养基中常用的添加物质胰岛素能加速葡萄糖的利用和抑制葡萄糖的生成,抑制脂肪的分解,促进脂肪的合成和贮存,促进蛋白质的合成,阻止蛋白质的分解,促进钾离子和镁离子穿过细胞膜进入细胞内;促进脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)及三磷酸腺苷(ATP)的合成。
结合胰岛素在细胞里的作用,它可以降低蛋白降解;降低脂肪降解;增加氨基酸的摄入;增加钾元素的摄入;增加葡萄糖的摄入,就是葡萄糖进入细胞,提供能量什么的.所以总体来说就是保持细胞的活性。
胰岛素主要作用在肝脏、肌肉及脂肪组织,控制着蛋白质、糖、脂肪三大营养物质的代谢和贮存。
(1)对糖代谢的影响。能加速葡萄糖的利用和抑制葡萄糖的生成,即使血糖的去路增加而来源减少,于是血糖降低。
①加速葡萄糖的利用。胰岛素能提高细胞膜对葡萄糖的通透性,促进葡萄糖由细胞外转运到细胞内,为组织利用糖提供有利条件,又能促进葡萄糖激酶(肝内) 和己糖激酶(肝外)的活性,促进葡萄糖转变为6磷酸葡萄糖,从而加速葡萄糖的酵解和氧化;并在糖元合成酶作用下促进肝糖元和肌糖元的合成和贮存。
②抑制葡萄糖的生成,能抑制肝糖元分解为葡萄糖,以及抑制甘油、乳酸和氨基酸转变为糖元,减少糖元的异生。
(2)对脂肪代谢的影响。促进脂肪的合成和贮存,抑制脂肪的分解。糖尿病时糖代谢障碍,脂肪大量动员,产生大量游离脂肪酸在肝脏氧化至乙酰辅酶A,然后变为酮体,若酮体产生过多则出现酮血症。胰岛素能抑制脂肪分解,并促进糖的利用,从而抑制酮体产生,纠正酮血症。
(3)对蛋白质代谢的影响。促进蛋白质的合成,阻止蛋白质的分解。
(4)胰岛素可促进钾离子和镁离子穿过细胞膜进入细胞内;可促进脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)及三磷酸腺苷(ATP)的合成。
另外,葡萄糖在红细胞及脑细胞膜的进出,葡萄糖在肾小管的重吸收以及小肠粘膜上皮细胞对葡萄糖的吸收,都不受胰岛素的影响。胰岛素作用的靶细胞主要有肝细胞、脂肪细胞、肌肉细胞、血细胞、肺脏和肾脏的细胞、睾丸细胞等。