磁珠法核酸提取技术是以纳米生物磁珠为载体的一种新型核酸提取技术，核酸分子可与磁珠表面的硅羟基发生特异性识别与结合，在外部磁场的作用下发生聚集或分散，彻(空)底摆脱传统核酸提取过程中离心、抽取上清液等手工操作流程，从而实现核酸提取纯化的方法。目前所使用的磁珠大多数都是“核-壳”结构，都是以具有超顺磁性的纳米微粒作为“核”，再在核的表面包裹上一层高分子有机化合物和一层功能基层作为“壳”，在溶液中有较好的悬浮性。在磁场中被磁化，在磁力的作用下聚集，极易与不具有磁性的物质分离开来，操作过程中无需离心等操作。

磁珠粒径选择？

粒径较大的磁珠，磁响应性比较大，捕获小片段核酸的能力大一点。粒径较小的磁珠，磁响应性比较小，捕获大片段核酸能力大一点。

上海惠诚生物提供6um超顺磁硅羟基磁珠(Cat No. HA21015)，浓度：120mg/mL; 40s磁响应(%):＞90%；600s磁响应(%):100%。

什么是磁分离?

磁分离利用磁场将微米大小的顺磁颗粒从悬浮液中分离出来。在分子生物学中，磁珠提供了一种简单可靠的纯化各种类型生物分子的方法，包括基因组DNA、质粒、线粒体DNA、RNA和蛋白质。

例如，在优化条件下，DNA选择性地结合到适当涂层的珠表面，将污染物留在溶液中。然后，你可以直接在分子生物学应用中使用这种纯化的DNA。

使用磁珠的一个关键优势是，你可以直接从原始样品中分离出核酸和其他生物分子，以及从各种不同类型的样品中分离出核酸和其他生物分子，只需很少的处理。这将磁珠与其他核酸分离方法区别开来，其他方法可能对不同类型的样本有不同的方案，并且需要更多的动手时间。

磁力架

磁力架提供了一种快速简单的方法来纯化特定的蛋白质，核酸和其他生物分子。利用磁珠将目标生物分子从生物样品中分离出来。对样品混合物施加磁力，被磁珠吸引的感兴趣分子从混合物中分离出来。磁分离技术在DNA和mRNA纯化、细胞分离、蛋白质纯化等方面有广泛的应用。上海惠诚生物提供50毫升磁力架，具有强大的，可移动的磁力和易于移液管访问。它有助于从各种液体样品介质中捕获、保留和释放磁珠，允许多达6个50mL样品的高通量并行处理。

磁珠法核酸提取由裂解、结合、洗涤、洗脱等步骤组成，不同厂家生产的磁珠法核酸提取试剂有所不同，主要体现在：（1）磁珠大小不同；（2）磁珠修饰方式不同；（3）洗涤方式不同；（4）样本量不同。

磁珠法如何提取DNA?

磁珠法提取DNA依赖于使用带有涂层的磁珠，只需调整缓冲条件就可以可逆地结合核酸。

核酸提取步骤

1. 样品准备

a) 过夜培养的菌液，转移至50 mL离心管，在离心机的水平转子上4000 rpm离心10 min，尽弃上清。

b) 将5 mL P1 Buffer（已加入RNaseA酶溶液）加入至50 mL离心管，菌体充分悬浮。

c) 加5 mL P2 Buffer到已悬浮好的菌液中，缓慢摇动混合均匀（不能剧烈震荡），进行裂解。操作时间不能超过5min，防止基因组污染。

d) 再向裂解体系中加入7 mL P3 Buffer，缓慢摇动混合均匀（不能剧烈震荡），出现絮状物沉淀。

e) 将中和后的50 mL离心管在离心机的水平转子上4000 rpm离心20 min。

f) 取出离心后的50 mL离心管，转移14 mL上清至新的50 mL离心管中。

2. 质粒抽提

a) 添加2.5 mL磁珠至上述新的50 mL离心管中，完成后再加入16.5 mL的Binding buffer（已加无水乙醇）至新的50 mL离心管中。

b) 放置旋转架上，孵育10 min。

c) 放置磁力架上，静置1-2 min，尽弃上清。

d) 加入30 mL Wash buffer（已加无水乙醇）至新的50 mL离心管中，放置旋转架上，孵育1 min。重复一次。

e) 放置磁力架上，静置1-2 min，尽弃上清。

f) 放置37℃培养箱 10 min，直到磁珠中酒精蒸发完(空)全。

g) 加入500-1mL无菌水溶解，孵育3-5 min。

h) 放置磁力架上，静置1-2 min，转移上清之EP管中。

i) 使用分光光度计检测A260。

【注意事项】

1. 试剂时间长可能会出现沉淀，使用前轻轻摇晃混合均匀。也可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2. 磁珠使用前充分摇匀。RNase保存在-20℃。试剂盒其他成分置于常温保存。

3. Buffer P1加入后一定要充分悬浮细菌，要保证看不到结块的菌，否则细菌不易被裂解，质粒产量会显著下降。

4. Buffer P2是否有沉淀。如有沉淀可用水浴（37℃）加热溶解，混匀后使用。

5. 基因组污染：Buffer P2和P3加入后轻轻摇晃，防止基因组断裂。

上海惠诚生物提供一站式科学服务，覆盖生命科学领域和分析化学领域设计开发全过程，提供实验室设计、实验室建设、仪器设备、耗材、试剂、技术服务等专项配套服务。按照客户的研发、生产和质量控制环节整合各种优质资源，优化资源组合，为客户提供整体解决方案。