奥浦迈无血清杂交瘤细胞培养基HybriSFM-P1B

HybriSFM-P1B 是无血清、含低浓度蛋白、专门针对高密度杂交瘤细胞生长开发的培养基，适用于不同杂交 瘤细胞高密度悬浮培养和蛋白抗体表达。

应用范围:HybriSFM-P1B 适用于科研和基于细胞培养的大规模生物制品的生产，但不可直接用于人体或作为药物使用。

储存：2~8℃冷藏，干燥避光保存 

运输：常温（液体）、冷藏（干粉）

液体培养基配制方法：

1.取最终配制体积 90%的超纯水，水温 25~35℃（注：一次性配制体积不低于 1L）； 

2.称量 16.61 g/L 干粉培养基，缓慢加入水中并搅拌； 

3.称量 2.45 g/L 碳酸(空格)氢钠，加入水中并持续搅拌；

4.搅拌 20 分钟；加入 5N NaOH 调节 pH 直至完(空格)全溶解；加 5N HCl 将 pH 调回至 7.0；

5.加超纯水校正到最终配积；用 NaCl 调节渗透压到 320±10 mOsm/kg； 

6.继续搅拌 10 分钟，无菌过滤到合适容器。

干粉及液体培养基质量指标

产品指标                  HybriSFM-P1B Medium     HybriSFM-P1B DPM 

pH 值                       7.0~7.5                          7.0~7.5 

渗透压(mOsm/kg)     300~340                         300~340 

溶解性                      ——                               按配制规程操作溶解良好 

内毒素(EU/mL)         ＜1.0                              ＜1.0 

无菌检查                  应无菌生长                      ——

培养条件 ：37°C，5-10%CO2 

摇床设置：转速 125-135 rpm

奥浦迈无血清杂交瘤细胞培养基HybriSFM-P1B

使用方法 

1. 直接转换 

如果当前杂交瘤细胞已经是悬浮培养于无血清培养基中，大部分情况下，可以直接适应奥浦迈培养基，只需按照 日常传代方式（稀释）更换培养基即可。

2. 去血清驯化 

如果细胞目前培养于添加血清的基础培养基中，则需要进行减血清驯化，下面为细胞驯化要点：

 1) 选用低代次，对数期细胞开始驯化； 

 2) 减血清可按照 10%、5%、2.5%、1%、0%的顺序进行，在每个血清含量进行细胞传代，直至细胞生长正 常，再进入下一个血清浓度。

3. 细胞传代 

当杂交瘤细胞密度达到(2~3)x106 cells/ml 时，将细胞以(0.2~0.3)x106 cells/ml 接种于新的培养基中，继续培养。 接种时无需离心，直接稀释即可。

4. 流加批次培养生产抗体 

对于基础培养基及其搭配补料，流加批次培养评价时没有固定的最佳补料方案，针对每个细胞和产品都应该利用 DOE 方式进行流加批次培养工艺的建立和优化。推荐的使用方案如下（流加批次培养最高细胞密度可以达到 10 x106 cells/ml，抗体产量超过 2.5 g/L）：

1) 用于流加培养实验的种子细胞密度约为 3 x 106 cells/ml，按(0.3~0.6)x106 cells/ml 密度接种； 

2) 建议每天取样检测细胞密度并进行生化分析。接种后第二天或第三天可以开始补料，之后按上表中提供的 策略，进行每天或隔天补料； 

3) 当糖溶度低于 3 g/L 的时候需要额外补加葡萄糖浓缩液至 6 g/L 终浓度。