OPM奥浦迈培养基SagiCHO Medium上海现货

SagiCHOTM 是化学成分确定（Chemically-defined）基础培养基，不含水解物、蛋白、生长因子及任何动物 来源的成分，适合于不同亚型中国仓鼠卵巢细胞（CHO-K1、CHO DG44 和 CHO-S 细胞）的高密度悬浮培养， 可实现重组蛋白和抗体的高水平表达。SagiCHOTM 基础培养基与高性能补料及超浓缩补料联用，可支持细胞高 密度生长及活率维持，实现更高水平的蛋白/抗体表达和质量。

应用范围

SagiCHOTM 可应用于 CHO 细胞的复苏、传代以及高密度流加培养。该基础培养基适用于科研和基于细胞培养 的大规模生物制品的生产，但不可直接用于人体或作为药物使用。

储存：2~8℃冷藏，干燥避光保存

运输：常温（液体）、冷藏（干粉）

液体培养基配制方法

1. 取洁净的配制容器，建议一次性配制体积不低于 1L；

2. 加入最终配制体积 90%的超纯水或注射用水，水温控制在 25~35°C；

3. 称量 21.73 g/L 干粉培养基，缓慢加入水中搅拌 10 分钟；

4. 称量 2.22 g/L 碳酸(空格)氢钠，加入水中搅拌；

5. 缓慢加入 5N NaOH 调节 pH 到 8.3-8.5，搅拌 30 分钟，此时应完(空格)全溶解；

6. 缓慢加入 5N HCl 将 pH 调回至 7.0；

7. 定容到最终配液体积，继续搅拌 5 分钟，测 pH，用 5N NaOH 或 5N HCl 将 pH 调回至 7.0；

8. 取样测渗透压，加入 NaCl 调节渗透压至 290±15 mOsm/kg（渗透压计算公式：NaCl 添加量（g）=配液体 积（L）*（290-检测值）/31.5）；

9. 继续搅拌 10 分钟，无菌过滤到合适容器，2~8℃避光保存。

培养条件

温度 37℃，湿度 80%，5~8% CO2

摇床设置：转速 110~150rpm（振幅 50 mm）

细胞复苏

1. 在 37℃水浴中快速（＜2min）融化冷冻的细胞；

2. 将冷冻管中的细胞液全部转移到 125ml 含有 30ml 预温过的 SagiCHOTM 培养基的摇瓶中；

3. 放入 37℃，5~8% CO2，转速 110~130rpm（振幅 50 mm），湿度 80%的摇床中培养；

4. 细胞至少传代 2 次，待其完(空格)全复苏，细胞倍增时间（Population Doubling Time，PDT）稳定后，可按计 划进行后续操作。

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细胞传代

1. 将 SagiCHOTM培养基放入 37℃条件下预热 20-30 min；

2. 取细胞密度≥1×106 cells/ml、活率≥90%、处于对数生长期中期的细胞进行传代；

3. 按接种密度为 0.5×106 ~ 1.0×106 cells/L 的最终传代体积，计算所需种子液量；

4. 无菌转移所需量的种子液，添加至含所需体积的已预热的 SagiCHOTM培养基的摇瓶中；

5. 将摇瓶放入温度 37℃，湿度 80%，转速 110~150rpm（振幅 50 mm），5%~8% CO2的细胞培养摇床中进 行培养；

6. 每 2~3 天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。

细胞驯化

直接接种法

1. 对于可以直接接种的细胞，可以从无血清培养基中直接接种到 SagiCHOTM 培养基中，接种密度参考传代 步骤，并需要依据具体情况而定。

2. 继续传代细胞，直到细胞稳定生长。

3. 传代几次后，细胞密度在接种的 3~4 天内达到 2×106 cells/ml 及以上、细胞活率＞90%，且倍增时间稳定， 此时可以认为细胞已被驯化成功。

梯度驯化法

1. 对于传统的生长在 5~10%血清或无血清的细胞，采用梯度驯化法，接种密度 3×105 ~4×105 cells/ml。

2. 监测细胞生长情况，直到细胞密度达到≥2×106 cells/ml。

3. 用 SagiCHOTM培养基：原始培养基=25:75 的比例稀释细胞。直到这个比例的培养基细胞生长良好，再进 一步稀释培养。在接下来的每次操作中，提高 SagiCHOTM 培养基的比例，如下表所示。

4. 在完(空格)全使用 SagiCHOTM 培养基接种 3~4 天之后，活细胞计数应该至少达到 2×106 cells/ml，细胞活性≥ 90%。此时，细胞已经驯化到 SagiCHOTM培养基中。

细胞冻存

1. 准备处于指数生长的中期，细胞活率＞90%，状态较好的细胞。

2. 测定活细胞密度，计算所需的冻存培养基体积，最终细胞密度＞1×107 cells/ml。

3. 准备所需的冻存培养基 90% SagiCHOTM 培养基+10%DMSO，4℃冷藏保存。

4. 400×g 离心 5 分钟，用冻存培养基重新悬浮细胞。

5. 根据项目具体需要，将悬浮液进行等分保存于适宜规格的冷冻管中。

6. 按照标准程序，对冷冻管进行自动或手工操作降温（每分钟降 1℃）。

7. 将细胞转移到液氮罐中保存。