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StarCHO 是专为 CHO 细胞设计开发的全新化学成分确定基础培养基,不含水解物、蛋白及任何动物来源,适用于常见中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(CHOZN、CHO-K1、CHO DG44 、CHO-S 等)的高密度悬浮培养,可实现重组蛋白的高水平表达。StarCHO 基础培养基与全新高性能补料 StarCHO Feed 及超浓缩补料CDFS36联用,可实现更高水平的蛋白表达和质量。
应用范围
StarCHO 可应用于 CHO 细胞复苏、传代以及高密度流加培养。该基础培养基适用于科研和基于细胞培养的大规模生物制品的生产,但不可直接用于人体或作为药物使用。
储存:2~8℃冷藏,干燥避光保存
运输:常温(液体)、冷藏(干粉)
液体培养基配制方法
1. 取洁净的配制容器,建议一次性配制体积不低于 1L;
2. 加入最终配制体积 90%的超纯水或注射用水,水温控制在 25~35C;
3. 称量 20.45 g/L 干粉培养基,缓慢加入水中搅拌 10 分钟;
4. 称量 2.22 g/L 碳酸(空格)氢钠,加入水中搅拌;
5. 缓慢加入 5N NaOH 调节 pH 到 8.3-8.5,搅拌 30 分钟,此时应完(空格)全溶解;
6. 缓慢加入 5N HCl 将 pH 调回至 7.0;
7. 定容到最终配液体积,继续搅拌 5 分钟,测 pH,用 5N NaOH 或 5N HCl 将 pH 调回至7.0;
8. 取样测渗透压,加入 NaCl 调节渗透压至 290±15 mOsm/kg(渗透压计算公式:NaCl 添加量(g)=配液体积(L)*(290-检测值)/31.5);
9. 继续搅拌 10 分钟,无菌过滤到合适容器,2~8℃避光保存。
StarCHO Medium全新CHO细胞化学成分确定培养基奥浦迈现货
培养条件
温度 37℃,湿度 80%,5~8%CO2
摇床设置:转速 110-150rpm(振幅 50mm)
细胞复苏
1. 在 37℃水浴中快速(<2min)融化冷冻的细胞;
2. 将冷冻管中的细胞液全部转移到 125ml 含有 30ml 预温过的 StarCHO 培养基的摇瓶中;
3. 放入 37℃,5~8% CO2,转速 110~130rpm(振幅 50mm),湿度 80%的摇床中培养;
4. 细胞至少传代 2 次,待其完(空格)全复苏,细胞倍增时间(Population Doubling Time,PDT)稳定后,可按计划进行后续操作。
细胞传代
1. 将 StarCHO 培养基放入 37℃条件下预热 20-30min;
2. 取细胞密度≥1×10 6cells/ml、活率≥90%、处于对数生长期中期的细胞进行传代;
3. 按接种密度为 0.5×10 6 ~ 1.0×10 6cells/L 的最终传代体积,计算所需种子液量;
4. 无菌转移所需量的种子液,添加至含所需体积的已预热的 StarCHO 培养基的摇瓶中;
5. 将摇瓶放入温度 37℃,湿度 80%,转速 110~150rpm(振幅 50mm),5%~8%CO2的细胞培养摇床中进行培养;
6. 每 2~3 天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。
细胞驯化
直接接种法
1. 对于可以直接接种的细胞,可以从无血清培养基中直接接种到 StarCHO 培养基中,接种密度参考传代步骤,并需要依据具体情况而定;
2. 继续传代细胞,直到细胞稳定生长;
3. 传代几次后,细胞密度在接种的 3~4 天内达到 2×10 6cells/ml 及以上、细胞活率>90%,且倍增时间稳定,此时可以认为细胞已被驯化成功。
梯度驯化法
1. 对于传统的生长在 5~10%血清或无血清的细胞,采用梯度驯化法,接种密度 3×10 5~4×10 5cells/ml;
2. 监测细胞生长情况,直到细胞密度达到≥2×10 6cells/ml;
3. 用 StarCHO 培养基:原始培养基=25:75 的比例稀释细胞。直到这个比例的培养基细胞生长良好,再进一步稀释培养。
4. 在完(空格)全使用 StarCHO 培养基接种 3~4 天之后,活细胞计数应该至少达到 2×10 6cells/ml,细胞活性≥85%。此时,细胞已经驯化到 StarCHO 培养基中。
细胞冻存
1. 准备处于指数生长的中期,细胞活率>90%,状态较好的细胞。
2. 测定活细胞密度,计算所需的冻存培养基体积,最终细胞密度>1×10 7cells/ml。
3. 准备所需的冻存培养基 90% StarCHO 培养基+10% DMSO,4℃冷藏保存。
4. 400×g 离心 5 分钟,用冻存培养基重新悬浮细胞。
5. 根据项目具体需要,将悬浮液进行等分保存于适宜规格的冷冻管中。
6. 按照标准程序,对冷冻管进行自动或手工操作降温(每分钟降 1℃)。
7. 将细胞转移到液氮罐中保存。