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国标用抗体纯化柱ProG上海惠诚供应
1. 产品简介
抗体纯化柱ProG以琼脂糖凝胶为基质,以重组Protein G为配基,具有良好的物理化学稳定性,配基不易脱落,寿命长,使用方便。该产品通过偶联的Protein G配基特异性地与抗体的Fc区结合,经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和细胞破碎液等样品中得到高纯度的单克隆抗体,尤其是羊IgG、马IgG、鼠IgG2a或人源IgG3等ProA介质结合能力弱的抗体。
2. 产品特性
参数 | 指标 |
柱体积 | 1ml |
基质 | 琼脂糖凝胶 |
配基 | r-Protein G |
形状 | 球形 |
介质平均粒径 | 90 μm (45-165) |
配基密度 | 5mg Protein G/ml wet gel |
动态载量 | 30mg-40mg h-IgG |
zui高流速(25℃) | 3ml/min |
zui高耐压 | 0.3 MPa (3 bar) |
pH稳定性 | 3~12(长时间);2~13(短时间) |
保存 | 4~8 oC(20%乙醇) |
3. 应用
抗体纯化柱ProG广泛用于各种抗体的分离纯化。层析操作通常包括平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。
层析系统连接柱子时,严防气泡进入,导致载量下降。
平衡:用5~10CV的平衡缓冲液(20 mM PB+0.15M NaCl,pH 7.0,添加适当浓度的NaCl抑制非特异性吸附)平衡层析柱,至流出液电导和pH不变(与平衡液一致)。
进料:样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制;低浓度样品溶液可用平衡液透析;高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱,样品应经离心或微滤(0.45μm)处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
淋洗:上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
洗脱:用洗脱缓冲液(20 mM乙酸钠,pH 3.0-4.0或0.1M甘(空)氨酸,pH 3.0)洗脱,收集流出液。洗脱后,应立刻用碱性缓冲液(如1M Tris/HCl, pH 9.0)将收集到的抗体溶液中和到中性,避免抗体失活,维持抗体的生物活性。
再生、原位清洗:介质使用数次(建议5-10次,具体次数与料液的种类和来源及实验要求有关)后,需要对介质进行再生、在位清洗。
(1)用0.1M的乙酸或0.1M的乙酸/20%乙醇淋洗柱子3-5CV,然后用缓冲液洗到中性即可重复使用;
(2)也可用0.05M NaOH+1M NaCl或6M盐酸胍淋洗柱子3-5CV,并用3~10 CV的纯水冲洗,然后用缓冲液洗到中性即可重复使用。
国标用抗体纯化柱ProG上海惠诚供应
其它注意事项:在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。