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VectorBuilder在线矢量设计

VectorBuilder提供了一个高度创新的基于web的平台，将复杂而直观的矢量设计与简化的在线订购相结合。我们的免费平台具有无限访问权限，您只需点击几下鼠标即可设计各种自定义矢量。您可以通过从我们的数据库中选择或粘贴自己的序列，轻松定制载体成分，包括启动子、ORF和标记。然后，您可以编辑您的序列，添加标签，执行密码子优化，等等！除了设计您的载体，您还可以从我们的平台订购您设计的载体的定制克隆以及相关服务，如病毒包装和质粒DNA制备。

如何使用矢量设计工作室

集锦

多种载体主链的收集，包括常规质粒、慢病毒、AAV、腺病毒、MMLV、piggyBac等

广泛的载体成分数据库，包括启动子、ORF、标记物、表位标签、shRNA

详细矢量图

服务指南

从Vectorbuilder用户友好的在线矢量设计平台设计自定义矢量非常简单、快速，并提供了一系列可定制的选项：

可用矢量系统查看更多

矢量设计工作室

一旦为实验选择了合适的矢量系统，就可以进入矢量设计工作室，使用各种自定义选项设计矢量：

1） 添加载体成分（如启动子、ORF、标记物、连接子等）

添加载体成分有三种方法：从我们流行的载体成分集合中选择，按感兴趣基因（GOI）搜索，或直接粘贴序列。通过GOI进行搜索时，您可以无限制地访问我们的ORF、shRNA和gRNA数据库，使您能够快速选择所需序列并将其插入到载体中。

2） 作为多顺反子表达多个基因

设计工作室允许你在一个启动子后面放置多达4个ORF作为多顺反子。多个ORF可以表达为单个融合蛋白，或者表达为通过2A或IRES连接体分离的不同蛋白。

3） 编辑ORF序列

将ORF添加到载体后，可以打开ORF编辑器添加表位标签或将突变引入序列。我们提供数十种流行的蛋白质标签，可以附加在ORF的N或C末端。其他方便的功能包括密码子优化、将核苷酸序列翻译成氨基酸序列、寻找ORF和查看反向互补链。

矢量信息概述

完成矢量设计后，您将被重定向到矢量信息页面。从这里您可以：

查看矢量的完整注释地图和序列

下载各种格式的矢量报告，包括PDF、GenBank、FASTA和SnapGene

查看矢量的价格和周转时间或提交价格查询

将矢量与病毒包装等下游服务一起添加到您的购物车中

将矢量设计保存到您的帐户

与同事分享矢量设计

检索矢量设计

唯的矢量ID会自动定给在VectorBuilder上创建的任何矢量。您可以使用此ID在不登录的情况下单击“设计矢量”下的“检索矢量信息”来检索有关矢量的完整信息。

请求设计支持

如果您在我们的设计工作室中设计矢量时遇到问题（例如，您需要使用我们数据库中不可用的主干或有序列

技术信息

矢量的基本组成部分

启动子-启动子是所有表达载体的关键组成部分，因为它驱动下游GOI的转录。载体启动子的选择取决于目标基因表达的所需位置和水平。启动子可以是普遍存在的，在所有细胞类型中驱动基因表达，也可以是组织特异性的，仅在特定细胞类型中推动基因表达。此外，启动子可以具有可变的强度（弱、中等或强），这取决于它们可以实现的靶基因表达水平。

ORF–ORF代表用户GOI的开放阅读框架，最终转化为功能蛋白。ORF对于表达载体是至关重要的，并且位于启动子的下游。当需要同时表达多种蛋白质时，可以将与这些蛋白质相对应的ORF放置在由要表达的连接体分离的同一启动子下

polyA信号–polyA代表多腺苷酸化信号序列，负责上游ORF序列产生的转录物的转录终止和多腺苷酸化。将polyA信号整合到载体中导致信使核糖核酸的多腺苷酸化，这保护信使核糖核酸不被核酸酶和磷酸酶降解。此外，多聚腺苷酸化对于信使核糖核酸的核输出到胞质溶胶和核糖体翻译蛋白质至关重要。

选择标记物–选择标记物使实验者能够成功识别已被载体正向转染或转导的细胞。两种类型的标记物通常用于选择正转染/转导的哺乳动物细胞——药物选择标记物和荧光蛋白标记物。药物选择标记物的作用是在携带该标记物的载体的细胞中赋予对相应抗生素的耐药性。另一方面，不携带载体的细胞对抗生素没有耐药性，因此在抗生素存在的情况下被杀死。荧光标记使研究人员能够通过荧光显微镜下的可视化或通过荧光激活的细胞分选（FACs）来选择正转染/转导的细胞。

复制起源——复制起源对细菌宿主细胞内质粒载体的复制至关重要。复制起源的选择通常取决于需要在宿主细胞内维持的载体拷贝数，这反过来又影响载体的稳定性。虽然高拷贝数质粒有助于从质粒制剂中获得更高的DNA产量，但低拷贝数质粒是表达有毒或不溶性蛋白质的选。此外，当在同一细菌细胞内生长多个质粒时，重要的是两个质粒不包含相同的复制来源，因为那样它们将不相容，并阻止质粒复制。

抗生素抗性基因——抗生素抗性基因允许选择携带载体的细菌细胞，从而促进载体在细菌群体中的维持。不携带载体的细胞对抗生素没有耐药性，因此在抗生素存在的情况下被杀死。

其他分量——虽然上面列出的分量通常存在于大多数矢量类型中，但根据其具体应用，在某些矢量类型中也可以找到各种其他矢量分量。例如，病毒载体如慢病毒和AAV载体的特征在于分别存在病毒序列如长末端重复序列（LTRs）和反向末端重复序列，这对于GOI在靶细胞中的病毒依赖性表达是必需的。类似地，在所有转座子载体中发现的末端重复序列对于转座子介导的GOI在相应转座酶存在的情况下转移到靶细胞中是必不少的。

此外，还有各种矢量分量，它们可能对矢量的基本功能不是必不少的，但它们可以帮助增强矢量功能的通用性。例如，通常引入多克隆位点（MCS）区域以将多个限制性内切酶位点添加到载体中，这使研究人员能够灵活地使用任何这些位点将其GOI克隆到载体中。诸如T2A和IRES的连接物是这种载体组分的另一个例子，其可能不需要载体工作，然而，当添加它们时，它们允许从与多顺反子表达盒相同的载体表达多个ORF，从而增强其功能。

矢量系统的选择

任何成功实验设计的关键因素之一是用于将GOI递送到靶细胞中的载体系统的选择。鉴于有各种病毒和非病毒载体可供选择，在开始设计载体之前，应考虑几个因素。一些关键的考虑因素包括：你的靶细胞转染容易还是困难？你想要瞬时表达还是稳定地整合到宿主基因组中？你需要使用定制的启动子来驱动你感兴趣的基因吗？您的载体将用于细胞培养还是体内？你需要条件或诱导型基因表达吗？你的GOI有多大？

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