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氨基酸(AA)检测试剂盒
产品名称 :氨基酸(AA)检测试剂盒
货号 :YX2159
产品规格 :100T
储存条件 :4℃。避光
有效期 :6个月
产品简介 :
检测原理是在弱酸条件下,氨基酸与茚三酮共热情况下能定量的产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans紫),其吸收峰在波长570nm处,在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与氨基酸浓度成正比,该试剂盒主要用于检测植物组织、血清、尿液、食品、药品等中的总游离氨基酸含量。
实验流程:
1、 准备样品
①植物样品:取新鲜植物组织,称取0.4g,按植物组织:AA Lysis buffer(1×)=0.4g:2.0ml的比例加入AA Lysis buffer(1×)匀浆或研磨,用无氨蒸馏水稀释至40ml,混匀,
②血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,
③细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如有必要用AA Lysis buffer(1×)进行匀浆,1000g离心5min,留取上清即为氨基酸粗提液
④高浓度样品:如果样品中含有较高浓度的氨基酸,可以使用AA Lysis buffer(1×)进行恰当的稀释。
2、配制茚三酮显色液: 取0.3g茚三酮,溶解于50ml茚三酮稀释液,搅拌或超声处理至溶解,即为茚三酮显色液。
3、配制茚三酮工作液: 取适量的茚三酮显色液、AA Assay buffer,按茚三酮显色液:AA Assay buffer=35:3的比例混合,即为茚三酮工作液
4、配制维生素C工作液: 取出1支维生素C,准确溶解于30ml无氨蒸馏水,混匀
5、配制系列氨基酸标准溶液:取出氨基酸标准(50μg/ml)恢复至室温,用无氨蒸馏水将其稀释至10μg/ml,然后按下表继续稀释:
加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
氨基酸标准(10μg/ml) | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
无氨蒸馏水 | 0.4 | 0.3 | 0.2 | 0.1 | 0 |
氨基酸浓度(μg/ml) | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 |
6、AA加样:按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入
加入物(ml) | 空白管 | 标准管 | 测定管 |
无氨蒸馏水 | 0.30 | — | — |
系列氨基酸标准(1~5号管) | — | 0.30 | — |
待测样品 | — | — | 0.30 |
茚三酮工作液 | 0.45 | 0.45 | 0.45 |
维生素C工作液 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
混匀,80℃中加热20min,冰水迅速冷却。 |
7、AA测定:加60%乙醇2.1ml,混匀;立即以空白调零,分光光度计(比色杯光径1cm)测定标准管、测定管570nm处吸光度(记为A标准、A测定)。