产品简介
产品名称:Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF(Strep II标签蛋白纯化柱)
产品货号:YXB2838
产品规格:1ml
储存条件:详见标签
本产品仅供科研实验用,不做其他用途。
详细介绍
Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF(Strep II标签蛋白纯化柱)
Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF
(Strep-Tactin Berpharose FF)
1. 产品介绍
Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF是一种将Strep-Tactin键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质,主要用于纯化Strep II标签蛋白。Strep II标签为8个氨基酸的小标签(WSHPQFEK),由于标签小,仅为1kDa左右,一般不影响融合后蛋白质的结构和功能,常用于融合表达蛋白质的检测和纯化。
本产品的配基Strep-Tactin是链霉亲和素(Streptavidin)的突变体,与链霉亲和素相比,Strep-Tactin对Strep II标签的亲和能力至少强10倍以上,能够在温和的条件下与Strep II融合蛋白结合和解离。由于Strep-Tacin对Strep II标签具有高度特异性,一般一步纯化就能获得高纯度的蛋白质样品。
Strep II标签蛋白与凝胶结合后可使用脱硫生物素竞争方式进行洗脱,该洗脱方式比较温和,一般不会影响蛋白质的性质。如蛋白质能耐受一定的碱,也可用碱液洗脱,比如10mM NaOH等。Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF能耐受较高的碱清洗,可以用0.5M NaOH进行再生清洗和去除热源等。另外,2-(4-羟基苯唑)苯甲酸(HABA)也可用于凝胶再生,过量的HABA能够竞争下脱硫生物素,并且在无HABA的缓冲液中,能将凝胶上的HABA洗脱。
2.规格
1ml(预装柱)、5ml(预装柱)、10ml(预装柱)、20ml、100ml、500ml 纯化流程
①推荐缓冲液
纯化Strep II标签蛋白
结合缓冲液:100mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,pH8.0;
或20mM NaH2PO4,280mM NaCl,6mM KCl,pH7.4
洗脱缓冲液:结合缓冲液+ 2.5mM脱硫生物素;
或10mM NaOH
再生缓冲液:0.5M NaOH;
或结合缓冲液+1mM HABA
②样品准备
上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。通常可用透析、超滤、稀释等方法处
理样品。并且上柱前应过0.45μm滤膜或高速离心去除不溶物。
③样品纯化
(1)平衡:取适量的Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF装入合适的层析柱中,用蒸馏
水清洗5个柱体积去除保存液,再用结合缓冲液平衡5个柱体积,建议流速为100cm/h。
(2)上样:将准备好的样品上柱,建议流速为20-100cm/h,可根据实际结合情
况选择流速,能获得较好的效果。
(3)再平衡:上样后用结合缓冲液平衡10个柱体积以上,或平衡至基线,洗去
杂质,推荐流速为100cm/h。
(4)洗脱:用洗脱缓冲液洗10-20个柱体积,建议流速为100cm/h,收集的洗脱
液应立即调节pH至稳定范围,并根据需要置换缓冲液。
(5)NaOH再生:洗脱目的蛋白后的柱子用蒸馏水清洗3-5个柱体积,并用0.5M
NaOH再生3-5个柱体积,再用蒸馏水清洗至中性,用20%乙醇保存柱子,或进行下
一次纯化。
(6)HABA再生:用脱硫生物素洗脱目的蛋白的,还可以用HABA缓冲液再生,
一般用HABA的结合缓冲液洗15个柱体积,再用结合缓冲液洗30个柱体积,然后可
以用20%乙醇保存柱子,或进行下一步纯化。HABA上柱后凝胶颜色会变为红橙色,
在结合缓冲液平衡后会恢复正常的白色,这种再生方式一般使用体积会大些。
5.注意事项:
1)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果。
2)本产品保存条件为20%乙醇,4~8℃。
3) 2-25℃,常压,避光运输
Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF(Strep II标签蛋白纯化柱)