产品名称：小鼠孕烯醇酮（PREG）ELISA 检测试剂盒

英文名称：Mouse Pregnenolone ELISA KIT Instruction

规格：48T/96T

有效期：6个月

保存条件：2-8℃

用途：

本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中小鼠孕烯醇酮（PREG）的含量。

检测原理 

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。 往预先包被小鼠孕烯醇酮（PREG）捕获抗体的包被微孔中，依次 加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻-底洗涤。 用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸 的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠孕烯醇 酮（PREG）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD  值），计算样品浓度。 

样品收集、处理及保存方法 

以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠 氮钠做为防腐剂。 

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何 细胞刺激，将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或4℃过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可，或将上清置 于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 

2. 血浆：用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集 后的 30 分钟内于 2-8℃ 1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检 测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 

3. 细胞培养物上清或其它生物标本：请 1000×g 离心 20 分钟， 取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反 复冻融。 

4. 组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残 留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织-剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1:9 的重量体积 比，比如 1g 的组织样品对应 9mL 的 PBS，具体体积可根据实验需 要适当调整，并做好记录。推荐在 PBS 中加入蛋白酶抑制剂）加 入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞， 可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于 5000 ×g 离心 5~10 分钟，取上清检测。

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项 检测。 

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻 存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分 解冻。 

自备物品 

1. 酶标仪（450nm） 

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200- 1000uL 

3. 37℃恒温箱 

4. 蒸馏水或去离子水 

试剂盒组成 

操作注意: 

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须5 在使用前达到室温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。所有液体组分 使用前充分摇匀。 

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液 体。温育过程中不要让微孔干燥掉。 

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响 OD 值。 

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。 

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。 

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。 

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂 白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。 

9. 不能使用过期产品。 

10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品 和检测装置。 

试剂的准备 

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 

2. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20× 洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。 

洗板方法 

1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩 尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。

2. 自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。 

操作步骤 

1. 从室温平衡 60min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用 自封袋密封放回 4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50μ L； 

3. 待测样本孔先加待测样本 50μL，空白孔不加； 

4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶 （HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴 锅或恒温箱温育 60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静 置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可 用洗板机洗板）。 

6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 

7. 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔 的 OD 值。 

实验结果计算: 

以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标， 在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到回归方程，将样 品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

试剂盒性能 

1. 检测范围: 6.25 ng/ml – 100 ng/ml。 

2. 灵敏度：最-低检测浓度小于 0.1 ng/ml。 

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 

 重复性：板内变异系数小于 10% ，板间变异系数小于 15% 

其他注意事项:

1. 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环 境密切相关，请务必准备充足的标本备份。 

2. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造 商或者不同批次的产品。严格遵守试剂盒的实验说明才会得到最佳的检 测结果。 

3. 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负 责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

4. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质 78 的引入导致 ELISA 实验结果偏差。 

5. 若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细 胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。 

6. 某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产 品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。 

操作安全须知:

1) 所有的化学试剂理应被认为具有潜在危害,任何的操作都必须提前做好实 验防护。在操作试剂盒或处理样本的区域请不要饮食。 

2) 推荐只有经过良好实验室培训的工作人员方可操作本试剂盒。操作时请 佩戴合适的防护设施，例如白大衣、实验手套、安全眼镜等。 

3) 请不要让试剂或样本接触皮肤、眼睛和粘膜等身体部位。如不慎接触， 请立即用大量清水清洗。 4) 试剂盒中的终止液为酸性溶液，在使用终止液时，请佩戴防-护服，做好 防护眼睛、手及面部等的措施。 

5)检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗 弃液和各种废弃物都应按照实验室规定进行处置，严禁随意丢弃。 

6)试剂盒的液体组分中，含有防腐剂，可能引起皮肤过敏反应，避免吸入烟 雾或与皮肤接触。底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入烟 雾。戴上防护手套，实验完成后彻-底洗手。 

免责声明 

1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的 一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。 

2. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行操作，实验者违反 说明书操作，后果由实验者承担。

小鼠孕烯醇酮（PREG）ELISA 检测试剂盒

南京亿迅生物科技有限公司出品各类ELISA试剂盒。产品质量稳定，价格实惠，在国内各科研院所和高校拥有良好的品誉。

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