Fluorochorome 品牌
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美国 Fluorochorome 公司于1985 年成立于美国科罗拉多州丹佛市,Fluorochorome 一直 致力于荧光染料的研究与开发,其产品Fluoro Gold(荧光金)自 1985 年来在全球范围 内被广泛应用,并有大量的参考文献。同时,Fluorochrome公司特别开发了高灵敏度的 Fluoro-Gold Antibody 、以及 Fluoro-Ruby(红色荧光金)等产品,Fluorochrome 公司坚 持以优质的产品和热情的服务赢得了良好的口碑。
Fluoro-Ruby (荧光红宝石)是与Fluoro-Gold和Fluoro-Gold 抗体互补的一款顺行神经示踪剂。其本质是四甲基罗丹明葡聚糖胺(Tetramethylrhodamine dextran-amine),分子量是10,500 Da,Ex=540 nm,Em= 600 nm,发红色荧光。
Fluoro-Ruby (荧光红宝石)是一种快速,灵敏,可靠且技术操作简单的荧光顺行示踪剂。同时也是检测早期急性轴索损伤和衰退的标志物。Fluoro-Ruby 的使用原理基本上同与Fluoro-Gold,已经流传使用多年且一致认为是好的顺行示踪剂。
工作液配置:用100 µl蒸馏水溶解10 mg Fluoro-Ruby粉末,配置成10%工作液;
﹄ 注射方法:通过脑立体定位注射的方式用1 µl哈密顿微量注射器压力导入示踪剂;注射剂量通常为0.02-0.1 µL,以长于10~15 mins的时间间隔逐步加入。
﹄ 作用时间:动物恢复一段时间后,通常在药物注射4-~14 天后处死。
﹄ 切片制备:向处死动物体内灌注中性甲醛(10%福尔马林或溶于0.1M 中性磷酸盐溶液的4%多聚甲醛),脑部摘除后放入添加20%蔗糖(起到冰冻保护作用)的相同固定液内再固定,至少过夜。之后用冰冻滑片式切片机或者恒冷箱切片机对脑组织进行切片,厚度通常在20-40 µm。
﹄ 检测玻片制备:将切片粘附在明胶包被的载玻片上,然后放入玻片加温器(slide warmer)烘干 (50-60 ℃,至少半小时);烘干玻片放入二甲苯中浸泡至少一分钟,用DPX封片剂进行封片。
﹄ 荧光观察:落射荧光显微镜检测,选用适合检测TRITC的滤片(绿光激发波段)。
使用指南和协议
Fluoro-Ruby用户指南和协议
10% 的 Fluoro-Ruby 溶液是将 10 mg Fluoro-Ruby 干粉溶解在 100 μL,蒸馏水中制成的。然后通过颅内立体定位注射,使用1uL, Hamilton 微量注射器对示踪剂进行压力注射。注射量通常为 0.02-0.1 L,并在 10-15 分钟的间隔内逐渐注射。让动物恢复,通常在 4-14 天后处死。
然后用中性缓冲甲醛(0.1M 中性磷酸盐缓冲液中的10%福尔马林或 4%多聚甲醛)对动物进行灌注。取出大脑,在相同的固定液中加 20%蔗糖进行固定至少一夜,以进行冷冻保护。然后用冷冻滑动切片机或低温切片机将大脑切成厚度通常在 20 至 40 微米之间的切片。
将组织切片安装在明胶涂层载玻片上,并在 50-60 摄氏度的载玻片加热器上风干至少半小时。然后将干燥的载玻片转移到二甲苯透明溶液中至少一分钟,然后用 DPX封固剂盖玻片。然后可以在荧光显微镜下使用适合可视化 TRITC(绿光激发)的滤光片检查载玻片。
氟红宝石产品信息
*注意:荧光金、荧光金抗体和荧光红宝石仅供实验室研究动物或体外试验研克使用。不可用于人体。这些药物供定期从事神经解
胡等研充和体外试验或仅用于安验室研克的动物的人员使用。
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