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树脂包埋(透射电镜)
树脂包埋(透射电镜)
树脂包埋实验步骤:
1、取材:电镜取材非常严格,取材过程中速度要快,5分钟内要将组织取出放入固定液中;取材组织块要小,一般要求将组织切成1立方毫米大小;取材部位要准确、取材温度要低是在4℃条件下进行;取材工具要干净,锋利。如果是贴壁细胞不可用酶消化下来,先吸去培养液然后加入电镜固定液用橡胶块刮下细胞,离心,细胞体积保证绿豆大小即可,然后吸去上清更换固定液继续固定。
2、固定:取材后要及时固定,组织、细胞、蛋白等固定选用2.5%中性戊二醛固定液,植物等标本则需要选用多聚甲醛和戊二醛的混合固定液。室温固定两小时左右后,放入4℃保存运输(如果是植物或者肺组织,则需要进行真空抽气固定,一般需要抽气固定24小时左右,直至标本*沉入容器底部)。
3、锇酸后固定:将标本从固定液中取出,用0.1mol/L的PB清洗并过夜,第二天转入1%锇酸后固定,固定时间普通标本2h左右,植物标本8至12h左右。
4、脱水:锇酸固定后的标本用用0.1mol/L的PB清洗后使用梯度乙醇脱水,浓度依次是50%、70%、80%、90%、95%、100%,植物标本则会在50%乙醇前面再增加一个30%乙醇梯度,脱水时间普通标本为10~15min,植物标本脱水时间为1~1.5h4、浸透:用丙酮作为乙醇和树脂间的过度溶剂,从纯丙酮开始,中间经过丙酮和树脂的混合剂,混合比例丙酮从高到低到纯树脂,整个浸透过程需要1~2天完成。
5、包埋:先将组织对应的标签放包埋板中,然后加入树脂,再将浸透好的样本放入包埋板中,调整好包埋面,然后放入恒温箱内熟化,熟化过程需要2~3天。熟化完成后,样本树脂包埋完成。
上海茁彩生物科技有限公司,可以承接诸多病理实验,样本不仅含有基础的动物组织切片,还包括植物叶片、动物细胞、骨片、脑片、皮肤等特殊样本。染色种类多,染色方法全.石蜡染色,冰切染色均可操作,同时还可以承接整体实验项目,细胞实验项目,包括样本的造模,细胞的培养,以及后续细胞的增殖、细胞粘附、细胞划痕等实验.