BIA Separations 关于蛋白纯化的问题
时间：2020-03-26 阅读：874
三国时代，诸侯争霸，群雄逐鹿
周瑜更是风度翩翩、文武双全，
全江东公瑾女孩的老公，
只可惜，到底诸葛孔明略胜*，
公瑾终饮恨江东。
pDＮA的纯化方案已经日渐成熟，
常规方法亦可以满足目前的需求，
奈何，偏偏又冲出一匹黑马，
以“省时、省力、省钱”获得业内人士交口称赞
虽然常规方法还算出色，
但依然不禁让人发出“既生瑜何生亮”之叹。
话说这位洋“孔明”，生于一户洋人家族：
BIA Separations，
更有一个洋气的名字：
BIA•整体柱•pDＮA纯化方案
对决：今天小编就带大家来看一场高手之间的
周瑜－常规方法
VS
诸葛孔明－BIA•整体柱•pDＮA纯化方案
| 周瑜－常规方法 | 诸葛亮－BIA整体柱纯化 | 整体柱纯化方案的优势 | |
| 纯化步骤及流程对比 | |||
| 步骤 | 三步法 | 两步法 | þ 步骤少 þ 裂解流程更加符合药品的生产标准 þ 纯化后的质粒纯度一样 þ 减少了分子筛的需求 þ 省时、省力、省钱 |
| 优化的前期处理 | 必须要用中空纤维柱浓缩样品 | 碱裂解法，CaCl2沉淀蛋白质和RNA | |
| 分子筛：去除RNA，同时将缓冲液置换为疏水柱缓冲液 | |||
| 第二步 | 疏水柱：分离开环DNA | DEAE离子柱：分离去除RNA，杂蛋白，内毒素等 | |
| 第三步 | 离子柱：分离杂蛋白，内毒素等 | C4柱：分离开环DNA | |
| 纯化成本对比 （以200mg小规模为例） | |||
| 所需耗材 | 10L分子筛 | 80ml套装柱 | þ 总体成本可降低50% þ 规模越大，成本降低越多 þ GMP级别的接头，更符合GMP标准 þ 轻松放大，避免了装填验证带来的烦恼 |
| 100ml疏水柱 | |||
| 100ml离子柱 | |||
| GMP接头 | 1L以下的层析没有GMP级别的接头，不符合GMP的标准。 | 从8ml开配有GMP级别的接头 | |
| 纯化效果 （相同的纯化体积，相同的洗脱方法，相同上样体积） | |||
| DEAE离子柱纯化的效果，质粒的纯度已经达到90%以上 | 不言而喻 | ||
| 疏水柱 | 常规疏水柱回收率和纯度不如BIA的C4整体疏水柱 | C4整体疏水柱的回收率和纯度要高于常规疏水柱 | |
各位做过pDNA纯化的老铁们，
说句心底话，
全面碾压有木有？
大写的“省时、省力、省钱”有木有？
话不多说，继续上图
BIA 整体柱两步法质粒纯化工艺流程总览
各位做过pDNA纯化的老铁们，
图看懂了吗？
至于常规方法的效率，
是不是配得上
它将近二倍于BIA整体柱纯化方案的价格，
我就说两句话:
一分钱一分货，
三分钱五分货，
五分钱十分货；
BIA的纯化结果已经证明了，
一张整票胜过一把零钱,
一个整体柱搞定一切……
后的后，
要感谢一个人，
那位pNDA纯化大神小哥哥，
无私地贡献出对比数据，
才有了今天精彩的*打架!
请收下小编的膝盖
