3D细胞接种的I型生物人工胶原蛋白凝胶

Collagel® Kit

Collagel®Kit具有用于创建3D细胞接种的生物I型胶原蛋白凝胶的所有组件（请参见表1）。

Type I Collagen (3 mg/ml in 0.01 M HCl)

5X MEM

Fetal Bovine Serum

1M Hepes

0.1 M NaOH in 5X MEM

一般用途的制备1 MLCOLLAGEL®胶原蛋白凝胶的协议

1.在1.5 ml离心管中，合并160μl试剂A，80μl试剂B和20μl试剂C。
2.在另一个1.5 ml离心管中，合并700μlCollagel®和40μl试剂D。充分混合后，确保Collagel®/ Reagent D混合物的pH值为7.0 – 7.2。 如果不是，则加入2.5μl试剂D，混合均匀，然后再次测试。 重复直至pH在所需范围内。
3.合并两个试管，并用移液器充分混合。
4.此凝胶溶液可用于重悬细胞沉淀或其他成分以进行铺板。 参见图2，了解37°C下的凝胶动力学。

在FLEXCELL®线性组织TRAIN®培养板中植入生物人工细胞水合物（BAT）的协议

1.根据您选择的培养基中用于原代培养或连续细胞系的既定方案准备细胞。
2.用0.05％的Trypsin，Trypsin-EDTA，0.05％的细菌胶原酶或其他方法释放细胞。
3.向细胞添加含血清的培养基，以中和Trypsin或胶原酶。
4.计数细胞并确定所需的细胞数量，对于6孔TissueTrain®培养板的每个孔，在150-200 ulCollagel®胶原蛋白凝胶中约50,000-200,000个细胞。注意：3D凝胶中的细胞接种密度将根据细胞类型而变化。我们建议测试细胞接种密度，以确定适合您的应用和细胞类型的细胞数。
5.用培养基洗涤细胞两次，以去除Trypsin或胶原酶。
6.将带有垫片的TissueTrain®板放置在Trough Loader™的顶部，并确保正确放置以实现密封真空。
7.使用Flexcell®FX-5000™张力系统启动大伸长率（〜90 kPa）静态下拉方案。注意：对于标准Collagel®，建议2小时的胶凝时间。还建议每6秒以大2％的大伸长率缓慢释放真空，直到达到0％的伸长率。
8.准备Collagel®培养基基质，请参见下表中的示例体积。在1.5毫升试管（未提供）中混合试剂A，B和C。在5.0毫升试管（未提供）中，将试剂D添加到Collagel®中并充分混合（*混合的溶液应变成浅桃红色）。取出10 µl ReagentD-Collagel®混合物，并涂在pH纸（未提供）上，以确保pH为中性（7.0-7.2是理想的）。注意：如果不是，则添加2.5 µL试剂D，然后再次检查。重复直至pH在所需范围内。将试剂A，B，C的混合物添加到Collagel®混合物中，然后通过移液将其充分混合。将所有试剂保持在4°C或在冰上制备。

Thermacol® Kit

Thermacol®试剂盒具有用于创建3D细胞接种的生物I型胶原蛋白凝胶的所有组件（请参见表1），此外还添加了含端肽的胶原蛋白，这为混合液在低温（4°C）下提供了更高的稳定性，不同 胶凝后的物理特性，以及快速可控的胶凝动力学。

一般使用的1毫升THERMOCOL®胶原蛋白凝胶制备协议

1.在1.5 ml离心管中，合并160μl试剂A，80μl试剂B和20μl试剂C。
2.在另一个1.5 ml离心管中，合并1,630μlCollagel®，70μlThermacol®和40μl试剂D。充分混合后，确保Collagel®/ Reagent D混合物的pH值为7.0 – 7.2。 如果不是，则加入2.5μl试剂D，混合均匀，然后再次测试。 重复直至pH在所需范围内。
3.合并两个试管，并用移液器充分混合。
4.此凝胶溶液可用于重悬细胞沉淀或其他成分以进行铺板。 关于在37°C下的凝胶化动力学，请参见图2。

3D细胞接种的I型生物人工胶原蛋白凝胶