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经销商厂商性质
上海市所在地
储运条件
长期保存请于-20℃避光保存,Mix 融解后可在4℃避光条件下稳定存放一个月,尽量避免反复冻融。
产品组分
Universal SYBR Green qPCR Mix
产品简介
Universal SYBR Green qPCR Mix 是SYBR® Green I 嵌合染料法专用qPCR 试剂,为2× 预混液,包含除引物和DNA 样品以外的所有qPCR 组分,可减少操作步骤,缩短加样时间,降低污染几率。其核心组分是经抗体修饰的热启动Taq DNA 聚合酶,配合精心优化的Buffer 体系以及PCR 反应促进因子,使产品具有特异性强、扩增效率高等特点,有效抑制非特异性扩增,可对宽广浓度范围的模板进行准确定量,获得稳定可靠的qPCR 结果。预混液中含有通用校正染料,与绝大多数 qPCR 设备兼容,包括需要 ROX 校正的仪器,实验过程中一般不需要额外添加校正染料。
使用方法
1. 使用注意
① 因Mix 中预混有染料,其保存或反应体系配制过程应避免强光照射;
② 使用前上下颠倒轻轻混匀Mix,请勿涡旋振荡混匀,避免产生过多气泡;
③ Mix 中含有Universal 校正染料,适用于所有机型,无需额外添加染料。
2. 建议的qPCR 反应体系
a. 通常推荐的引物终浓度为0.2 μM,反应效果不佳时可在0.1~1 μM 范围内进行调整;
b. 推荐模板加样量为1~2 μl,如模板类型为未稀释cDNA 原液,模板添加量不应超过总反应体系的10%。不同种类DNA 模板中含有的靶基因拷贝数目不同,必要时可进行梯度稀释,以确定最佳的DNA 模板添加量。
3. qPCR 反应程序(可根据机型适当调整)Universal SYBR Green qPCR Mix
两步法
三步法
a. 根据引物的Tm 值进行退火& 延伸(退火)温度的设定;若扩增片段在200bp 以内,退火& 延伸(延伸)时间可以设置为15 sec;此外,退火& 延伸(延伸)时间的设置还需根据您使用的qPCR 仪所需要的最短数据采集时间自行调整;
b. 不同qPCR 仪的熔解曲线采集程序有差别,一般可使用仪器默认的熔解曲线采集程序。
4. 实验优化
若使用默认反应条件反应性能不佳时,则需要进行反应条件的优化,可以从引物浓度以及扩增程序两个方面进行:
① 引物浓度调整
当引物终浓度在0.1~1.0 μM 范围之间变化时,引物浓度越低,扩增特异性越高,但扩增效率会有所下降。
② 扩增程序优化
需提高扩增特异性,可使用两步法程序或提高退火温度;需提高扩增效率,可使用三步法程序或延长延伸时间。
5. 引物设计原则
① 扩增产物长度建议控制在80~200 bp;
② 引物长度为18~25 bp;
③ 正向引物和反向引物的Tm 值相差不超过1℃为佳,Tm 值控制在58~62℃为佳;
④ 引物的GC 含量控制在40%~60% 之间;
⑤ 引物A、G、C、T 整体分布尽量要均匀,避开T/C 或者A/G 的连续结构(特别是3' 端);
⑥ 引物3' 端最后一个碱基最好为G 或者C;
⑦ 避开引物内部或者两条引物之间的互补序列;
⑧ 使用NCBI BLAST 功能检索确认引物的特异性。
美国Azaood公司成立于2004年,是一家开发和生产用于生命科学研究、诊断和生物技术应用的高质量纯化酶、蛋白质、核酸和细胞分离试剂盒、胎牛血清的lingdao者;Azood公司是通过了ISO9001认证的主要制造商,可以满足从研究到大规模批量生物加工和OEM应用与要求的公司。