黄曲霉毒素亲和柱操作步骤简介
时间：2022-02-15 阅读：1531
黄曲霉毒素（Aflatoxin，AF）是食品中产泛存在的一种高致癌性真菌毒素，是Asperilus flavus和Asperillus parasiticus的二次代谢产物，黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1，AFM1）是动物摄入黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）后在体内经羟基化而形成的产物，主要存在于动物的可食部分，如乳、肝、蛋类等，其中以乳形态较为常见。是到目前为止所发现的毒性较大的真菌毒素。它可通过多种途径污染食品和饲料，直接或间接进入人类食物链，威胁人类健康和生命安全，对人体及动物内脏器官尤其是肝脏损害严重，该毒素是黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株的代谢产物，普遍存在于霉变的粮食及粮食制品中。鉴于黄曲霉毒素对人类的巨大危害性，我国对其在食品中的含量作了严格规定，其中，乳制品中黄曲霉毒素允许量为5ug/kg（即5ppb）。
黄曲霉毒素亲和柱的功能基于抗原与抗体间可逆的特异性结合反应，使其可从复杂样品基质中特异性地回收目标化合物。上样后，柱中以共价键形式偶联在凝胶上的抗体会与抗原（即目标化合物）特异性结合，杂质不会被结合，大部分随样品溶液流出小柱。通过淋洗的方式除去小柱内剩余杂质后，使用纯甲醇或其他洗脱液（根据对应产品说明书选择）进行洗脱即可得到洁净的目标化合物溶液，可直接用于后续检测。
黄曲霉毒素亲和柱操作步骤简介：不同标准样品的提取不太一样，以国标 GB/T5009.22-2016 方法固体样品为例
1.提取样品：粉碎、称重5g样品；用甲醇/水（70/30V/V）混合物将样品高速混匀3分钟。
2.过滤：将提取的样品槽纹滤纸或普通滤纸过滤。准确移取 8.0mL 滤液并加入 42.0mL1%Tween-20 PBS 或1%TritionX-100PBS 稀释，用玻璃纤维滤纸过滤，至滤液澄清，量取 25mL滤液备用。
3.吸附、淋洗：将免疫亲和柱连接于 50.0mL 玻璃注射器下。准确将处理好的样品滤液注入玻璃注射器中， 调节下滴速度,控制样液以 1mL / min~3mL / min 的速度稳定下滴。待样液滴完后（注：不要用空气吹出残留的液体，防止下一步出现堵柱子的现象） ,往注射器筒内加入 2× 10mL 水,以 2mL / min~4mL /min 稳定流速淋洗免疫亲和柱。待水滴完后,用真空泵抽干亲和柱。 准确加入 1.0mL 色谱级甲醇洗脱， 流速为 1mL/min~2mL/min（1 滴/秒），收集全部洗脱液于玻璃试管中。并收集于HPLC进样小瓶中。
4.测定：HPLC直接进样，在经过柱分离后，被UVD光化学衍衍生器衍生化，被荧光检测器记录各种黄曲霉毒素的浓度。