犬瘦素(LEP) ELISA 试剂盒

英文：Canine leptin (LEP) ELISA Kit

规格：96T/48T

试剂盒质控数据

试剂盒的质控和质量密切相关。我们可以在说明书中可以找到质控数据，在购买前应检查试剂盒是否进行过质控实验。检查试剂盒是否经过批次内（Intra-Assay）及批次间（Inter-Assay）的精密度检测、掺入回收实验、线性稀释实验及交叉反应等测试，确保试剂盒的结果重现性及准确性。（CV% 一般小于 10% 比较好，线性和回收率的范围在 80%-120% 比较合适）

试剂盒的有效期

一般试剂盒的有效期为半年到一年，样本准备的时间需要考虑进试剂盒的有效期。一般建议一个试剂盒一次用完，如确需分次使用，需确认标准品有多份。标准品稀释之后需分管保存，理论上是48小时内用完，但实在是样本收集需要时间的话，尽量在一周内用完。

抗原和抗体的结合范围

在选择试剂盒的时候还应注意抗原和抗体的结合范围是全长蛋白还是活体剪切体或者磷酸化特异性位点的蛋白。比如Human Caspase-7 ELISA Kit检测的是全长蛋白，Human Cleaved Caspase-7(Asp198) ELISA Kit检测的则是活体剪切体，Human Phospho-AKT1(S473) Quantitative ELISA kit检测的是S473磷酸化的AKT1蛋白。应根据自己实验目的准确选择相应的试剂盒。

检测的指标数量

ELISA试剂盒更适合用于单个指标的大量样本检测，如果检测指标超过 5 个，且样本量较小时，ELISA 检测方法并不是*。建议考虑多因子检测方法，例如Raybiotech抗体芯片或者Luminex液相芯片方法，CBA检测方法等

犬瘦素(LEP) ELISA 试剂盒   ELISA检测系统是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段，有着十分重要的作用。操作步骤虽然看起来比较简单但是实验过程有很多的操作要点需要掌握，操作步骤中如果稍有不慎，操作不合理的地方，就会造成很多问题从而影响到ELISA试剂盒检测的准确性，大大降低试验质量。比如说花板，ELISA试剂盒假阳性，全显色，全部显色，显色比空白还低……这就需要我们在实验过程中多做总结，逐步完善，还有就是要多多学习，分享学习心得。下面就大体总结一下ELISA实验的常见问题和解决方法，同大家一起分享。

1、包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以被其识别，所以保存抗原很重要。还有有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被，我把方法简要的列出如下:①亲和素生物素:先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法均匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。ELISA试剂盒②脂类物质:可将其在有机溶剂（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，开盖置冰箱或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。③小分子必须依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。

2、包被液的选择，一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。应注意以下原理：由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有坚固的理论外也要实践，看一下最终可不可以应用到自己试验当中去。人ELISA试剂盒常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。

3、封闭：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。常用封闭剂有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使用（5%-10%）;还有一些稀有用到的各种动物血清（主要为了排除相似蛋白干扰）和酪蛋白等等。但最终选用什么，要依据试验具体来实践。

4、洗涤板：可以说在ELISA操作中，洗涤是最主要的关键技术。因为聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的，清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干扰物质，在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。所以在洗板时会有一定误差，人为因素很大（当然有条件的用洗板机除外），洗的不*或串了孔，对如此灵敏的ELISA系统可是不小的影响。

5、加抗体标本（和二抗）:注意该换枪头时换枪头。ELISA试剂盒标本稀释一般可用pbs稀释，也可用封闭液去稀释。如需加二抗，还要注意二抗的工作浓度，太高浪费，太低则着色浅。

6、显色:显色系统又很多，我们一开始做的时候，要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵，AP结合物可加叠氮钠。

7、每次做尽量要把阴阳空三个对照做好，如出现问题也好分析。

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