环氧乙烷不损害灭菌的物品且穿透力很强，故多数不宜用一般方法灭菌的物品均可用环氧乙烷消毒和灭菌。例如，电子仪器、光学仪器、器械、书籍、文件、皮毛、棉、化纤、塑料制品、木制品、陶瓷及金属制品、内镜和一次性使用的诊疗用品等。环氧乙烷是目前主要的低温灭菌方法之一。
操作程序
(1) 根据试验要求，制备枯草杆菌黑色变种芽孢悬液和菌片。菌片放入双层聚乙烯塑料袋内密封包装，每袋2片。每次试验用20袋。
(2) 将灭菌器上、中、下3层，每层内、中、外各设一点，共设9点。每点物品中间布放1袋，共需18袋试验菌片。另将一袋（2片）菌片放置在室温条件下作为阳性对照。
(3) 按使用说明书所规定的环氧乙烷浓度、作用时间、柜内的温度和相对湿度，在满载条件下进行环氧乙烷灭菌处理。满载用物品，随灭菌器用途而定。处理完毕，取出菌片，分别移种于5 ml 营养肉汤培养基中，置37℃ 培养箱内培养，7d后观察最终结果(定性培养检测)。
对难以判断结果的营养肉汤管，取其中0.2ml悬液接种营养琼脂平板，用无菌L棒涂抹均匀，置37℃ 培养箱内培养。48h后涂片染色，显微镜下观察菌落形态，或进一步做其他试验，判断有无生长或生长的是否为试验菌。若为非试验菌，则应重新进行试验。
(4) 测试中，应同时设立定性和定量阳性对照组与阴性对照组。
(5) 定量阳性对照组，以同批试验用菌片置室温下，待消毒或灭菌试验组达规定作用时间后，立即将该菌片2片分别放入含5.0mlPBS试管中，各振敲打80次。取洗液按2.1.1.3 所示方法进行活菌培养计数。
(6) 定性阳性对照组，以同批试验用菌片置室温下，待灭菌试验组达规定作用时间后，立即将该菌片2 片，分别接种于5.0ml 营养肉汤培养基，放入温箱中作定性培养，观察有细菌生长情况。
(7) 阴性对照组，以同批次试验用未染菌样片2 片，分别接种于5.0ml 营养肉汤培养基，同时将未接种过的营养肉汤培养基放入培养箱中作定性培养，观察有无细菌生长。
(8) 试验重复5 次。
(9)在5次试验中，每次试验中的阳性对照菌片，回收菌量均应在5×10cfu/片～5×10cfu/片；定性阳性对照组，细菌生长良好；阴性对照应无菌生长。阳性或阴性对照若有不符合上述要求的结果，试验作废，重新进行。
评价规定
在5 次灭菌试验中，每次试验中的定量阳性对照组，检测回收菌量均达5 × 10cfu/ 片～5 × 10cfu/ 片；定性阳性对照组，细菌生长良好。阴性对照应无菌生长。所有试验菌片全部无细菌生长时，可判为灭菌合格。
注意事项
(1) 温度和相对湿度对环氧乙烷气体杀菌效果影响较大，故应严格控制试验中的有关条件。
(2) 环氧乙烷液体可溶解聚乙烯、聚氯乙烯等，不可将其液体滴落于此类物品上。环氧乙烷不论液体或气体，均可损坏赛璐璐制品，试验时应予注意。
(3) 环氧乙烷易燃易爆，操作现场应采取防火防爆措施，不得有明火作业及电火花发生。
(4)吸入过多环氧乙烷气体，可引起头痛，呕吐等中毒症状，严重者可致肺水肿等。工作环境中应有良好的通风。在每日8h 工作中，环氧乙烷浓度应不超过1.82mg/m3 （1ppm），15min 工作中暴露浓度不超过9.1mg/m3（5.0ppm）。如出现中毒症状，需迅速离开现场。轻者呼吸新鲜空气，直到症状消除；重者应及时送医院。
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