1.2立方脉动灭菌箱0.8立方百万级干热灭菌柜

全自动环氧乙烷灭菌柜_EO气体消毒

目的

测定环氧乙烷灭菌柜(下简称灭菌器) 对细菌芽孢的杀灭能力，以验证其灭菌性能是否符合原设计规定。

试验器材

(1) 枯草杆菌黑色变种( ATCC 9372 )芽孢菌片。

含菌量要求为5 ×10cfu/片～5 × 10cfu/片(按活菌培养计数结果计)。在环氧乙烷量为600mg/L±30mg/L，温度为54℃±2℃，相对湿度为60%±10% 条件下，菌片上芽孢存活时间应≥7.8min，杀灭时间≤58min，D值为2.6min～5.8min。

(2) 染菌载体( 10mm × 10mm ，以布片为代表，必要时可随灭菌对象，增用或改用其他载体。

(3) 聚乙烯塑料袋( 封装菌片用，大小为60mm× 40mm ，厚0.2mm～0.4mm )。

(4) 活菌培养计数所需器材(见2.1.1.3 )。

(5) 使用说明书中规定灭菌器可处理的物品(装填灭菌器，使达满载要求)。

全自动环氧乙烷灭菌柜_EO气体消毒

操作程序

(1) 根据试验要求，制备枯草杆菌黑色变种芽孢悬液和菌片。菌片放入双层聚乙烯塑料袋内密封包装，每袋2片。每次试验用20袋。

(2) 将灭菌器上、中、下3层，每层内、中、外各设一点，共设9点。每点物品中间布放1袋，共需18袋试验菌片。另将一袋（2片）菌片放置在室温条件下作为阳性对照。

(3) 按使用说明书所规定的环氧乙烷浓度、作用时间、柜内的温度和相对湿度，在满载条件下进行环氧乙烷灭菌处理。满载用物品，随灭菌器用途而定。处理完毕，取出菌片，分别移种于5 ml 营养肉汤培养基中，置37℃ 培养箱内培养，7d后观察结果(定性培养检测)。

对难以判断结果的营养肉汤管，取其中0.2ml悬液接种营养琼脂平板，用无菌L棒涂抹均匀，置37℃ 培养箱内培养。48h后涂片染色，显微镜下观察菌落形态，或进一步做其他试验，判断有无生长或生长的是否为试验菌。若为非试验菌，则应重新进行试验。

(4) 测试中，应同时设立定性和定量阳性对照组与阴性对照组。

(5) 定量阳性对照组，以同批试验用菌片置室温下，待消毒或灭菌试验组达规定作用时间后，立即将该菌片2片分别放入含5.0mlPBS试管中，各振敲打80次。取洗液按2.1.1.3 所示方法进行活菌培养计数。

(6) 定性阳性对照组，以同批试验用菌片置室温下，待灭菌试验组达规定作用时间后，立即将该菌片2 片，分别接种于5.0ml 营养肉汤培养基，放入温箱中作定性培养，观察有细菌生长情况。

(7) 阴性对照组，以同批次试验用未染菌样片2 片，分别接种于5.0ml 营养肉汤培养基，同时将未接种过的营养肉汤培养基放入培养箱中作定性培养，观察有无细菌生长。

(8) 试验重复5 次。

(9)在5次试验中，每次试验中的阳性对照菌片，回收菌量均应在5×10cfu/片～5×10cfu/片；定性阳性对照组，细菌生长良好；阴性对照应无菌生长。阳性或阴性对照若有不符合上述要求的结果，试验作废，重新进行。

1.2立方脉动灭菌箱0.8立方百万级干热灭菌柜