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层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，从而分离的一种层析法。

层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外， 直径加大，洗脱液体体积增大，样品稀释度大。分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度，分离度与柱高的平方根相关，但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞，一般不超过1米。分族分离时用短柱，一般凝胶柱长20-30厘米，柱高与直径的比较5:1─10:1，凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。 分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1，常用凝胶柱有50×25厘米，10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小，如果支掌滤板下的死体积大，被分离组分之间重新混合的可能性就大，其结果是影响洗脱峰形，出现拖尾出象，降低分辩力。在精确分离时，死体积不能超过总床体积的1/1000 

以中压柱层析法提取分离冬凌草甲素为例：

1.吸附剂的处理及柱子装填

将一定量薄层层析硅胶装人搪瓷盘置于烘箱中，于105。C活化2H后，取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充，填满整个柱体，不留死体积，密封后用柱塞式计量溶剂泵按丙酮一石油醚(5：95)比例泵人溶剂，至溶剂流出止。

2.上样

将冬凌草的乙醇提取物400G用适量丙酮溶解，泵人中压柱柱头，然后泵人石油醚1000RID。

3.洗脱

以一定比例的石油醚一丙酮为洗脱液，60ML/MIN的流速进行梯度洗脱，柱的使用压力为2～ 3KG/C 。按每份500ML收集，TLC检识展开剂(2：8)，显色剂5%香草醛浓硫酸乙醇液

至洗脱*，相同流份合并，回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。加人适量甲醇热溶后自然放置，析出结晶，为冬凌草甲素。

4.层析柱再生、平衡

有效成分经TLC检识全部流出后，用纯丙酮5000ML再生，丙酮一