成骨细胞的来源主要有骨、骨膜、骨髓及骨外组织。及人的胚胎颅骨或新生动物的颅骨为成骨细胞的常用来源。Robey(1985)采用胶原酶处理松质骨骨块以除去结缔组织和骨髓造血组织，再将处理过的骨块进行培养来获得更纯净的成骨细胞。将人胚胎颅骨中所获得的成纤维样细胞通过加入β-甘油磷酸钠诱导分化后培养3周，可见细胞基质钙化，表明所得细胞为具有很强分化能力的成骨细胞。将以乙二胺四乙酸和胶原酶消化胎儿颅骨获得的细胞进行体外培养，发现其在人工材料上能持续增殖20倍以上，且具有高ALP活性。取人松质骨建立成骨细胞体外培养模型并得到了大量纯化的成骨细胞。选用成年雌性大鼠松质骨在较短时间内得到较多数量的成骨细胞。骨膜中的细胞早已被证实在适当的条件下可形成骨和软骨。Vacanti等(1993)从新生小牛肩胛骨骨膜中分离出成骨细胞并种植到多孔聚羟乙酸支架上，7～10d后成骨细胞发生增殖。
用胶原酶短时预消化法从取自新西兰兔胫骨上端内侧面骨膜上短时间内得到高纯度的成骨细胞。骨髓分造血和基质两大系统，其成骨能力来源于基质。张银刚等(2000)采用胎兔长管骨骨髓细胞进行体外培养，证明其有骨细胞系特性，可作为修复骨缺损的种子细胞。周皮细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、成肌细胞都曾有过向成骨细胞转化的报道。