单胺氧化酶（MAO）活性检测试剂盒（微量法）
时间：2023-11-27 阅读：124
单胺氧化酶（MAO）活性检测试剂盒（微量法）
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
产品货号：BA1078
产品规格：100管/96样
产品简介：
MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎动物的各种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，在无脊椎动物、 豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢，含量较低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纤维化的程度。此外，MAO 活性异常导致细胞内单胺类神经递质运转出现紊乱，从而引发多种病症。
MAO 催化单胺类底物脱氨生成相应的醛，进一步氧化成酸；底物在360nm处有特征吸收峰，测定360nm光吸收下降的速率，计算MAO活性。
产品内容：
提取液一：液体100ml×1瓶，4℃保存。
提取液二：液体100ml×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体60ml×2瓶，4℃保存。
试剂二：液体2ml×1管，4℃避光保存。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液一）进行冰浴匀浆，10000g，4℃，离心10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心30min，弃上清；加入1.0 mL 预冷的提取液二，震荡混匀，16000g，4℃，离心40min，弃上清；沉淀加入预冷的1.0 mL试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定）。取上清置于冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加1mL提取液一），冰浴超声破碎细胞（功率300W，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心30min，弃上清；加入1.0 mL预冷的提取液二，震荡混匀，16000g，4℃，离心40min，弃上清；沉淀加入预冷的1.0 mL试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定）。取上清置于冰上待测。
3、血清：直接测定。
二、测定操作表
1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至360nm。
2、操作表
试剂名称（μL） | 空白管 | 测定管 |
酶液 | 20 | |
试剂一 | 180 | 160 |
试剂二 | 20 | 20 |
混匀，于微量石英比色皿/96孔UV 板，空白管调零，测定360nm处吸光值A1，然后37℃水浴60min，测定360nm 处吸光值A2，△A=A1-A2。 | ||
注意：空白管只需测定一次。
三、MAO活性的计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1、按蛋白含量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每毫克蛋白质1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
MAO活性（U/ mg prot）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 114×△A÷Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：37℃，pH7.6时，每克样品1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
MAO活性（U/ g）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷（V样÷V样总×W）÷T= 114×△A÷W
3、按细胞数量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每104个细胞1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
MAO活性（U/ 104 cell）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）÷T= 114×△A÷细胞数量
4、按照液体体积计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每升血清1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
MAO活性（U/ L）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷V样= 114000×△A
ε：底物摩尔消光系数，1460L/ mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间，60min，W：样本质量，g。
b.用96孔板测定的计算公式如下：
1、按蛋白含量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每毫克蛋白质1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
MAO活性（U/ mg prot）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 228×△A÷Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：37℃，pH7.6时，每克样品1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
MAO活性（U/ g）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷（V样÷V样总×W）÷T= 228×△A÷W
3、按细胞数量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每104个细胞1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
MAO活性（U/ 104 cell）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）÷T= 228×△A÷细胞数量
4、按照液体体积计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每升血清1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
MAO活性（U/ L）=△A÷ɛ÷d ×V反总÷V样= 228000×△A
ε：底物摩尔消光系数，1460L/ mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间，60min，W：样本质量，g。
注意事项：
1. 吸光度变化应该控制在0.01~0.8之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
2. 样品蛋白质含量需要另外测定。