单胺氧化酶（MAO）检测试剂盒（醛苯腙比色法）
时间：2023-11-27 阅读：130
单胺氧化酶（MAO）检测试剂盒（醛苯腙比色法）
产品货号：BA1574
产品规格：50T/100T
产品简介：
单胺氧化酶(Monoamine Oxidase，MAO)是一组催化多种单胺类化合物氧化脱氨的酶，属于细胞外酶，含有铜离子，分布于肝脏、肾脏等组织的线粒体内，其含量分布为肝脏＞心脏＞肾脏＞脑＞肺＞骨骼肌。血小板、胎盘中也含有MAO。线粒体中的MAO与膜紧密结合，仅少量为可溶性的，存在于细胞质中，血液和结缔组织中的 MAO为水溶性。
尚宝生物 单胺氧化酶 (MAO)检测试剂盒 (醛苯腙比色法)其检测原理是待测样品在MAO作用下，氧化底物苄胺生成苄醛，后者经催化反应生成醛苯腙，呈棕红色，通过分光光度计检测470nm处吸光度，根据标准曲线即可测出MAO活力。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成：
名称 | 50T | 100T | 保存条件 |
试剂(A): 苄醛标准(5mmol/L) | 1ml | 2ml | 2-8℃，避光 |
试剂(B): MAO Assay buffer | 50ml | 100ml | 室温 |
试剂(C): 苄胺缓冲液 | 50ml | 100ml | 2-8℃，避光 |
试剂(D): 苄醛显色液 | 25ml | 50ml | 2-8℃，避光 |
试剂(E): 苄醛显色缓冲液 | 50ml | 100ml | 室温 |
自备材料：
1. 蒸馏水
2. 离心管或小试管
3. 比色杯
4. 分光光度计
使用方法：
1. 准备样品：
①血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-70℃冻存，用于MAO的检测。
②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清， -70℃冻存，用于MAO的检测。
③高活性样品：如果样品中含有较高活性的MAO，可以使用MAO Assay buffer稀释。
④(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MAO含量。
2. 稀释标准品：用MAO Assay buffer稀释苄醛标准(5mmol/L)至0.5mmol/L，即为苄醛标准工作液，4℃保存，备用。以苄醛标准工作液 (0.5mmol/L)，按下表制备标准曲线。
加入物 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
苄醛标准工作液(ml) | 0 | 0.01 | 0.02 | 0.04 | 0.08 | 0.12 | 0.16 | 0.20 | 0.24 |
MAO Assay buffer(ml) | 0.75 | 0.74 | 0.73 | 0.71 | 0.67 | 0.63 | 0.59 | 0.55 | 0.51 |
相当于苄醛(nmol/管) | 0 | 5 | 10 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 | 120 |
相当于MAO单位(nmol/h∙L) | 0 | 12.5 | 25 | 50 | 100 | 150 | 200 | 250 | 300 |
3. MAO检测：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
空白管 | 标准管 | 测定管 | |
待测样品(如血清等)(ml) | 0.2 | - | 0.2 |
MAO Assay buffer(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
苄胺缓冲液(ml) | 0.5 | 1.0 | 1.0 |
混匀，37℃水浴2h。 | |||
苄醛显色液(ml) | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
苄胺缓冲液(ml) | 0.5 | - | - |
混匀，37℃水浴20min。 | |||
苄醛显色缓冲液(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
蒸馏水(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
4. 混匀，分光光度计470nm处检测吸光度值，比色杯1.0cm光径，以蒸馏水调零，读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。绘制标准曲线，根据(A测定-A空白 )之差值在标准曲线上查出MAO活力单位。酶活力高于上限者，应将样品稀释后重新测定，结果乘以稀释倍数。
计算：
MAO活性单位的定义：在37℃ 1ml血清中MAO 1h催化底物产生1nmol苄醛为一个MAO酶活力单位。根据酶活性定义，计算出样品中的MAO活性。
以标准管苄醛nmol数为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，用(A测定-A空白之差值在标准曲线上查出待测样品的苄醛nmol数。)
血清MAO活力(U/ml或nmol/h∙ml)=苄醛(nmol)×VT ×N/t×Vs =苄醛(nmol)×2.5
组织MAO活力(U/mg或nmol/h∙mg)=苄醛(nmol)×VT ×N/(t×Vs ×待测样品蛋白浓度mg/ml)
式中：
VT =待测样品总体积(ml)
N=待测样品检测前的稀释倍数
Vs =检测时所用样品体积(ml)
t=反应时间(min)
注意事项：
1. 胆红素浓度小于257μmol/L，血红蛋白浓度小于4g/L，对MAO活力检测没有影响。
2. 若更换为国际单位，应除以60。
3. 加入苄醛显色缓冲液后，应1h内检测完毕。
4. 在皂化过程中，震荡不要剧烈，以免形成乳化层。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。