MetaSPR技术在分子垂钓中的应用
时间:2024-07-08 阅读:194
在生命科学的探索中,每一次分子的精准“相遇”,不仅映射了生命内在的复杂旋律,还潜藏了解读疾病、促进健康乃至革新治疗手段的无限可能。想象一下,如果我们能够设计出契合的“诱饵”,专门吸引并识别那些关键的靶标分子,那将开启怎样的科研奇迹?
精心策划的分子“邂逅”
目前,Pull-Down技术作为分子垂钓的主流方法,却因其操作复杂和非特异性高而受限。而一个理想的捕获过程应该确保目标分子在固定状态下的活性结合,最小化非特异吸附,实现高效的洗脱以降低损失,并能精确地鉴定分子间的相互作用。针对于此,MetaSPR技术创新性地通过检测特定波长下透射光的光密度值变化,实时捕捉并记录分子相互作用的动态过程,极大地提升分析速度与精确性,成为驱动领域前进的关键技术。
01 分子垂钓实验技术路线
02 MetaSPR分子垂钓技术路线
03 分子垂钓实验流程
药物或蛋白表位垂钓与鉴定
TNF-α即肿瘤坏死因子α,是TNF超家族的配体。它是一种多效细胞分子并介导细菌感染的免疫应答,在多种免疫相关疾病中扮演着重要的角色。
近年来开发抗TNF-α的抗体药物在关节炎、银屑病、炎症性肠病和其他一些炎症性疾病中取得了不同程度的成功,使其成为目前市场价值较高的生物药靶点之一,相关的原研生物药近十年来的销售总额持续增长。利用MetaSPR技术进行抗体药物表位垂钓与鉴定对于加速药物开发进程和深入研究抗体药物的作用机制来说,是至关重要的。
抗体药物表位垂钓与鉴定
MetaSPR技术鉴定目标抗体与TNFa结合且亲和力较高
将TNFa蛋白消化成多肽
氨基传感器固定抗体,抓取多肽片段并洗脱进行质谱鉴定;鉴定出与靶标抗体结合的多肽片段为—SDKPVAHVVANP—
合成多肽序列并与抗体再次进行MetaSPR技术分析,确认多肽与抗体亲和力为4.90E-10M
中药小分子垂钓
TMBIM6是一种含有BAX抑制基序跨膜蛋白,在细胞凋亡、内质网应激反应以及线粒体稳态等方面有重要作用。研究表明TMBIM6通过组装特定的蛋白质复合体,促进肿瘤细胞的存活和增殖,在多种癌症类型中过表达。TMBIM6下调可抑制肿瘤细胞的侵袭和转移能力。
中药小分子垂钓与鉴定
将TMBIM6蛋白固定在MetaSPR芯片
流通千金子中药粗提物并与TMBIM6蛋白进行结合、洗脱
将收集的洗脱液进行质谱分析鉴定,初步锁定候选化合物13-OD
分离或合成13-OD并与TMBIM6蛋白进行MetaSPR确认及体内外活性评价