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PriCells:原代细胞培养技术

时间:2021-09-06      阅读:214

一、组织块直接培养法
1、取材,用 Hank's 液洗涤三次,并剔除脂肪,结缔组织,血液等杂物。
2、用手术剪将组织剪切成 1mm3左右的小块,再用 Hank's 液洗三次。
3、将组织块转移至培养瓶,并贴附于瓶底面。
4、轻轻将培养瓶翻转,瓶底朝上,向瓶内注入适量的培养液,将培养瓶放置在
37℃恒温箱内培养。
5、放置待组织小块贴附后,将培养瓶慢慢翻转平放,使组织浸入培养液中(勿

使组织漂起),37℃继续培养。


二、消化培养法
1、取材,用 Hank's 液洗涤三次,并剔除脂肪,结缔组织,血液等杂物。
2、用手术剪将组织剪切成 1mm3 左右的小块,再用 Hank's 液洗三次。
3、视组织块量加入酶液,37℃中消化 20—40 分钟,每隔 5 分钟振荡一次,或用
吸管吹打一次,使细胞分离。
4、加入 3—5ml 培养液以终止酶消化作用(或加入相关酶抑制剂)。
5、静置 5—10 分钟,使未分散的组织块下沉,取悬液加入到离心管中。
6、1000rpm,离心 10 分钟,弃上清液。
7、加入 Hank's 液 5ml,冲散细胞,再离心一次,弃上清液。
8、加入培养液 1—2ml(视细胞量),血球计数板计数。

9、将细胞转移到培养瓶中,37℃下培养。


三、 器官培养
1、将不锈网做成支架形状,调整其高度至培养皿的 1/2 深度平面,在其表面放
置 0.5μm 孔径滤膜。
2、将培养液加入培养皿中,使液面刚刚接触到滤膜,但不要使其浮起。
3、将要培养器官组织放在滤膜上,一般厚度不要超过 200μm,水平面积不超过
10mm2。
4、将上述准备好的培养物放入 CO2培养箱,并加注氧气调整氧分压,最好到 90%。
5、培养过程中要注意观察培养液平面,尽可能保持在与滤膜一致的水平上。
6、上述可进行器官培养 1-3 周,每 2-3 天换液一次,并根据情况做进一步实验
和检测。

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