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PriCells:原代细胞鉴定技术

时间:2021-09-06      阅读:192

一、形态学鉴定
1. 在倒置显微镜中直接观察活细胞的形态学特征
2. 细胞染色检查 :
a) 将无菌玻片置于细胞培养皿中,加细胞悬液后培养;
b) 待细胞长满玻片后取出,用 PBS 清洗,之后放于载玻片上,待其自然干燥;
c) 用 PBS/甲醇(1:1)固定 15 分钟;
d) 弃固定液,加合适的染色液染色;
e) 染色完毕后用清水洗净,置于空气中干燥,
f) 干燥后,用二甲苯透明,光学树脂封片后观察。


二、免疫组织细胞化学鉴定
1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中,将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬
片;
2. PBS 清洗标本 3 次,各 1 分钟;
3. 4%多聚甲醛固定 15 分钟;
4. 置于空气中干燥;
5. PBS 清洗标本 3 次,各 2 分钟;
6. 0.5%Triton X-100 孵育 1 次 20 分钟;
7. PBS 清洗标本 3 次 各 2 分钟;
8. 3%H2O2孵育 15 分钟;
9. DPBS 清洗标本 3 次 各 2 分钟;
10. 封闭血清孵育(5%正常二抗血清 DPBS 液 20 分钟)
11. 一抗孵育,4℃ 过夜或 37℃ 60 分钟;
12. PBS 清洗标本 3 次 各 5 分钟;
13. 二抗工作液孵育(湿盒)37℃ 30 分钟;
14. PBS 清洗标本 3 次 各 5 分钟;
15. C 液(湿盒) 37℃ 30 分钟;
16. PBS 清洗标本 3 次,各 5 分钟;
17. 用显色液进行显色;
18. 蒸馏水洗涤 2 次 1 分钟;
19. 苏木素复染 1 分钟;
20. 清水洗涤 30 分钟;
21. 光学树脂封片后观察。

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