一、介绍
 

　　猪蓝耳病毒PCR核酸检测试剂盒是即用型PCR试剂盒的改良产品，含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂、上样染料等所有PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行PCR反应，具有广泛的用途。
 

　　细胞炎症因子检测试剂盒的主要组成部分包括特异性抗体、酶标记物、底物、标准品和其他辅助试剂。这些试剂共同作用，使得细胞因子能够被特异性地捕获、识别和定量。
 

      1. 方便，用户只需准备模板和引物既可以进行PCR实验。

 

　　2. 快捷，操作步骤已经限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
 

　　3. 本产品A型含电泳染料，PCR反应液可直接上样电泳，进一步简化了操作。
 

　　4. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。能扩增各种常见的DNA样品。
 

　　5. 产物可直接用于T载体克隆，不需要额外的加A反应。
 

　　使用及效果：将本产品15μL与用户自备的模板，引物和水共15μL混合后，直接进行PCR反应(PCR参数由用户自己确定)，反应结束后直接取10μL电泳检查扩增结果。
 

　　二、组成及试剂配制：
 

　　1、酶标板：一块(96孔)。
 

　　2、标准品(冻干品)： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200U/L，然后做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)，分别配制成200U/L，100U/L，50U/L，25U/L，12.5U/L，6.25U/L，3.12U/L，样品稀释液直接作为空白孔0U/L。如配制100U/L标准品：取0.3ml (不要少于0.3ml )200U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
 

　　3、样品稀释液：1×20ml。
 

　　4、检测稀释液A：1×10ml。
 

　　5、检测稀释液B：1×10ml。
 

　　三、使用及效果：
 

　　PCR反应特点：
 

　　(1) 特异性强
 

　　PCR反应的特异性决定因素为：
 

　　①引物与模板DNA特异正确的结合；
 

　　②碱基配对原则；
 

　　③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
 

　　④靶基因的特异性与保守性。
 

　　其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
 

　　(2) 灵敏度高
 

　　PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中小检出率为3个细菌。
 

　　(3) 简便、快速
 

　　PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
 

　　(4) 对标本的纯度要求低
 

　　不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。