了解和认识胎牛血清,特殊加工工艺血清,您知道几种?
时间:2021-08-18 阅读:10379
血清作用原理:
正因为血清来源于动物,含有细胞培养中所需的各种营养(血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等),所以奠定了血清是细胞培养实验中最基本普遍试剂的基础。血清通常用作细胞生长的添加物,拥有多种功能和用途,如:富含大分子蛋白,低分子量的营养素,作为氨基酸、碳水化合物、维生素的额外来源;提高介质的缓冲能力;可结合或中和有毒成分;减少细胞氧化应激,减少细胞凋亡;提供促进生长的因子,有助细胞适应环境。
▽ 成分表
血清通过牛龄进行分类,可大致分为:
胎牛血清(Foetal Bovine Serum,简称FBS)、国产胎牛血清(并无明确定义,但通常用此命名)、新生牛血清(Newborn Calf Serum,简称NBCS,或称小牛血清)、成年牛血清(Adult Bovine Serum,简称ABS)。
不同牛龄血清所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组分与比例不同。
▽ 比较
一、透析胎牛血清
①细胞培养条件下稳定同位素标记技术(简称SILAC)
这是一项以质谱为基础的定量蛋白质组学技术,全称为Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)。它将13C或15N标记的氨基酸掺入到培养基中培养细胞,来标记细胞内新合成的蛋白质,一般培养5-6代,细胞中的蛋白质将都被同位素标记。然后质谱分析,即可比较经过不同处理的细胞,其内部蛋白质丰度的变化。它还可用于正常细胞与病理状态细胞二者的比较。为避免胎牛血清中天然氨基酸的干扰,这时就需要用到透析胎牛血清,以保证掺入细胞蛋白中的氨基酸均为标记氨基酸(常采用赖氨酸或精氨酸)。
②工程细胞株的筛选
以常见的工程细胞株CHO-DFGRˉ为例,该细胞自身缺乏二氢叶酸还原酶(DHFR),必须在添加了次黄(嘌)漂呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培养液中才能得以存活。如将含有目的基因与DHFR基因的质粒转染细胞,则可以得到在不含上述添加剂的培养基上也能生长的细胞克隆。通过甲氨蝶呤(MTX)进一步筛选,可进一步得到能表达大量目的蛋白的细胞克隆。这时的胎牛血清由于不含有次黄(嘌)漂呤和胸腺嘧啶等,也常作为选择培养基的一部分,参与阳性转染细胞克隆的筛选。
二、碳吸附胎牛血清
活性炭能够结合脂溶性分子,通过碳吸附可降低血清中许多激素及生长因子的浓度,如雌二醇、皮质醇、皮质酮、孕酮、B类维生素、睾酮及T3、T4、前列腺素等。该血清适用于上述一些分子可能干扰实验结果的实验中,对于那些需要这些分子的细胞培养,也可能降低细胞生长性能。
碳吸附胎牛血清用于体外培养,去除背景值以验证激素的作用效果,研究包括醇类受体连接,细胞受体类固醇调节,各种组织激素分泌和甲状腺激素功能。
适用于:培养干细胞、原代细胞、神经细胞、人类癌细胞、人类骨髓细胞、白血病细胞、人类胚肺成纤维细胞、人类脑神经细胞和瘤细胞等细胞。
三、去外泌体胎牛血清
△外泌体
胎牛血清中含有大量的外泌体,但在外泌体研究中,如果仍然使用胎牛血清培养细胞,并通过收集上清液来提取外泌体进行实验,那么胎牛血清中本身的牛源外泌体将会对实验分析造成极大的干扰。去外泌体血清是将由无菌采集的健康胎牛血清经过过滤,去除≥99%的胎牛血清内源外泌体,还可使细胞在培养时与未处理的胎牛血清具有相同的增殖速率和形态。
四、四环素调控系统胎牛血清
五、低IgG胎牛血清
六、去脂胎牛血清
去脂胎牛血清在细胞培养中用量较多,其含有丰富的细胞生长必须的营养成分,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。
①提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物以及主要的低分子营养物。
②提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
③有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热源质结合,起到解毒作用。
④是细胞贴壁、铺展在塑料培养基上所需因子来源。
⑤起酸碱缓冲液作用。
⑥提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
去脂胎牛血清可用于蛋白激酶CK2-α’与腺样囊性癌肺转移相关性研究:
①蛋白激酶是酶类这个家族中最庞大的一员,被用来完成蛋白磷酸化作用的催化,这是控制细胞生命活动中最通常的机制。其中*有效性的蛋白激酶之一可能就是CK2。蛋白激酶CK2(protein kinase CK2, PKCK2),过去曾经被称为酪蛋白激酶-2或Ⅱ(cascin kinase2 or Ⅱ)。它是由两个催化亚基(aa’)和两个调节亚基(ββ)构成的不均一四聚体。
七、热灭活系列血清
☆ 血清的使用方法
血清从冰冻区中取出后(切勿直接将血清从-20℃置入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀),放置于2℃~8℃中使之融化,解冻过程中间歇地轻轻摇晃均匀,待全部溶解后再分装或直接使用。*融解的血清从4℃拿出,按要求比例(5%-20%)加基础培养基配置成*培养基,建议使用不完时,置于4℃冰箱存放并于1-2周内用完。
☆ 使用血清时的注意事项
血清沉淀的物质主要有:纤维蛋白(絮状沉淀),脂蛋白,冷凝集素,玻连蛋白,胎球蛋白,磷酸钙(显微镜下小黑点沉淀),胆固醇等。
哪些原因容易导致血清沉淀:
1、温度改变太大,血清由-20℃直接放入37℃解冻,因温度改变剧烈容易导致沉淀。
2、血清在室温或4℃冰箱放置时间太久,血清中的不稳定成分会被破坏,影响细胞生长效果;导致血清品质变差,也会产生沉淀。
3、血清分装冻存时,注意在不产生气泡的情况下摇晃均匀,避免因血清成分浓度改变产生沉淀。
4、血清灭活后容易产生沉淀,如需使用灭活血清,请按56℃,30分钟,轻微摇晃原则操作,灭活温度过高、时间过长、摇晃不均都容易产生沉淀。
5、如有血清沉淀,分装后进行离心处理,建议400g离心5分钟,取上清使用。
结语:
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品牌 | 名称 | 血源 | 货号 | 规格 |
美国Zeta Life | 澳洲胎牛血清 | 澳洲 | Z7010FBS-500、Z7010FBS-100 | 500ml/100ml |
美国Zeta Life | 超低内毒素胎牛血清 | 哥伦比亚 | Z7180FBS-500、Z7180FBS-100 | 500ml/100ml |
美国Zeta Life | 南美胎牛血清 | 乌拉圭 | Z7181FBS-500、Z7181FBS-100 | 500ml/100ml |
美国Zeta Life | 南美胎牛血清 | 巴西 | Z7185FBS-500、Z7185FBS-100 | 500ml/100ml |
美国Zeta Life | 法国胎牛血清 | 法国 | Z7186FBS-500、Z7186FBS-100 | 500ml/100ml |
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