血清沉淀是否会影响细胞生长？如何避免？
时间：2021-08-18 阅读：1414
血清是细胞培养试剂中最基础普遍的试剂之一，之前我们已经介绍过了有关特殊加工工艺血清的一些小知识（了解和认识胎牛血清，特殊加工工艺血清，您知道几种？），那么今天我们将继续了解有关血清沉淀与血清热灭活的相关知识~
血清沉淀是否会影响细胞生长？如何避免？
血清沉淀
血清中经常会出现肉眼可见的沉淀，其成分有多种类型，产生的原因有很多。主要有纤维蛋白（絮状沉淀）、甲胎蛋白、脂蛋白、冷凝集素、玻粘连蛋白、磷酸钙（显微镜下小黑点沉淀）、胆固醇等。
●纤维蛋白（Fibrin）
血清中肉眼可见的沉淀物大多属于这一类型。由于在生产过程中，血清采集、过滤（3 次 0.1μm过滤）和灌装处理都是在低温条件下快速完成, 此时血清中纤维蛋白原（Fibrinogen）处于溶解状态。但在解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集，形成肉眼可见的沉淀。
▲ 纤维蛋白沉淀图
●磷酸钙（Calcium Phosphate）
这是一种常见的沉淀成分，通常会造成血清出现云雾状浑浊。当血清在 37℃保存时，这种现象尤其明显，在倒置显微镜下可观察到小黑点的存在。这些小黑点在布朗运动的作用下四处游动，常被误认为是微生物污染。
●其他成分（Other）
血清中的其他成分也会形成沉淀，例如胆固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等。
2. 沉淀是如何形成的？
造成沉淀的主要原因是温度的改变、热灭活、反复冻融、长期储存于2-8℃或者室温。
3. 血清沉淀会影响细胞培养吗？
我们在出厂前都会对血清进行一系列质检测试，确保血清质量达到严格标准。血清测试和细胞培养经验也表明，其沉淀成分不会影响血清作为细胞培养添加物的表现。这一点得到了众多用户和其他血清供应商的肯定。解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集，形成肉眼可见的沉淀。
磷酸钙颗粒经常会被当成微生物污染而引发不必要的担忧。一般情况下，当操作人员融化血清后注意到有雾状浑浊时，常将其存放在 4℃冰箱中观察，并考虑接下来是否继续使用。但这样会使沉淀进一步增多，反而会使血清更加浑浊，进而误以为存在血清污染。并且，在倒置显微镜下，可在血清中观察到小黑点（磷酸钙颗粒的布朗运动），更容易使人误以为存在微生物污染。
为防止这类误解的产生，我们不建议用户培养血清来验证是否存在污染，而是将血清直接接种在细菌培养基上进行培养，以观察是否有细菌的增殖。并且，进行革兰氏染色，并在油镜（100 X 10 倍）下观察可直接确认是否存在微生物污染。
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●正确解冻
首先，应按照逐步解冻的方式正确解冻血清：从-20℃取出后，置于4℃冰箱缓慢解冻，最后置于室温完成解冻。如果直接从-20℃拿到室温或37℃水浴解冻，则非常容易产生沉淀。在解冻过程中，请注意，应时不时缓慢摇晃血清瓶，可减少沉淀的产生。为避免反复冻融，建议您将血清分装使用。
●使用和保存注意事项
血清沉淀很难预测和避免，出现沉淀后也无需担忧，这并不会影响血清的品质。已知血清沉淀在以下条件下会有增多的可能：
1) 热灭活；
2) 37℃培养；
3) 反复冻融；
4) 伽马射线照射；
5) 2-8℃长期保存；
6) 长期保存于可自动化霜的冰箱中（温度不稳定）；
●血清沉淀的形成机理多种多样，具体的机理尚不十分明确。我们尚不能准确预测和控制血清沉淀的产生。目前市面上所有品牌的血清产品都存在沉淀现象，这一点可以在各品牌网站上关于沉淀问题的声明上得到证实。
5. 有沉淀时如何处理？
我们建议您采用2000rpm离心5分钟，取上清使用就好，比过滤方便，不需要另外准备滤芯和针筒，且不容易污染。
总结建议
血清产品中出现沉淀属于正常现象，不会影响到血清的品质，对细胞培养也不会产生影响，大家可以放心使用，若不立即使用，血清应保存在-20℃以下。
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