免疫组化实验详细步骤汇总
时间:2024-06-11 阅读:474
步骤:
1.切片准备:将组织进行石蜡包埋,切成薄片并贴附于载玻片上。-用到的产品:载玻片等。
2.烤片:将切片放入烤箱中适当温度烤片,使切片紧密贴附。
3.脱蜡:依次使用二甲苯等进行脱蜡处理。
- 用到的产品:二甲苯、乙醇等。
4.水化:梯度乙醇水化至水。
5.抗原修复:根据需要选择合适的抗原修复方法,如热修复或酶修复等。
- 用到的产品:抗原修复液等。
6. 灭活内源性过氧化物酶:使用过氧化氢溶液处理。
- 用到的产品:3%过氧化氢溶液。
7. 封闭:用血清或 BSA 等封闭非特异性结合位点。
- 用到的产品:封闭液。
8. 一抗孵育:滴加特异性一抗,湿盒中孵育。
- 用到的产品:一抗。
9. 洗片:用 PBS 多次冲洗。
10. 二抗孵育:加入相应二抗孵育。
- 用到的产品:二抗。
11. 洗片:再次 PBS 洗。
12. 显色:使用合适的显色剂显色,如 DAB 等。
- 用到的产品:DAB 显色试剂盒等。
13. 复染:如用苏木精复染细胞核。
- 用到的产品:苏木精染液等。
14. 脱水透明:梯度乙醇脱水,二甲苯透明。
15. 封片:中性树胶封片。
需要注意的是,具体步骤和产品可能因实验条件和抗体要求等有所不同,在实际操作中需根据实际情况进行调整和优化。
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