细胞增殖及毒性检测CCK试剂盒——CCK8

一、包装规格

货号：K009-100、 K009-500、K009-1000、K009-3000

规格： 100T 、 500T 、 1000T 、 3000T

储存条件: 4℃避光保存，有效期一年。

二、产品说明

Cell Counting Kit 简称 CCK 试剂盒，为 MTT 法的替代方法，是一种基于 WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲 氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

CCK 法与其它检测方法之间的比较：

CCK 用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定等

三、操作说明

Ⅰ、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2、按比例（例如：1/2 比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5 个细胞浓度梯度，每组 3-6 个复孔。

3、接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X 轴），OD 值为纵坐标（Y 轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲 线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入 CCK 后的培养时间。）

Ⅱ、细胞活性检测

1、在 96 孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（在 37℃,5% CO2 的条件下）。

2、向每孔加入 10 μL 的 CCK 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数）。

3、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。

4、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。

5、如果暂时不测定 OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶 液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。

Ⅲ、细胞增值-毒性检测

1、在 96 孔板中配置 100μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时（在 37℃，5% CO2 的条件下）。

2、向培养板加入 10μL 不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24 或 48 小时）。

4、向每孔加入 10μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数）。

5、将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。

6、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光度。

7、如果暂时不测定 OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶 液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。

注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

备注：

①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入 CCK 试剂后的培养时间。

②有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异。加入 CCK 试剂时， 建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰 OD 值读数。

③白细胞可能需要培养较长时间。

④当使用标准 96 孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为 1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于 2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果 要使用 24 孔板或 6 孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的 10% 加入 CCK 溶液。

⑤如果没有 450nm 的滤光片，可以使用吸光度在 430-490 nm 之间的滤光片，但是 450nm 滤光片的检测灵敏度最高。

⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

活力计算： 细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0 加药）-A（空白）] ×100

A（加药）：具有细胞、CCK 溶液和药物溶液的孔的吸光度 A（空白）：具有培养基和 CCK 溶液而没有细胞的孔的吸光度

A（0 加药）：具有细胞、CCK 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力 保存条件：4℃干燥避光保存，有效期一年。

仅供科学研究使用，禁止用于它用。

细胞增殖及毒性检测CCK试剂盒系列货号规格：

Zeta Life介绍：
美国 Zeta Life 公司成立于 1989 年，是国际无血清细胞培养基 DMEM/F12 主要完成人，有三十多年的胎牛血清、无血清细胞培养基、以及干细胞、免疫细胞及肿瘤细胞等多种不同类型哺乳动物细胞的无血清培养液生产经验；也是目前世界胎牛血清、无血清培养基最大的 OEM 供应商之一；每批血清均有完整的血源证明文件、兽医师检验证明及品质测试报告；ZETA LIFE 血清在 100 级的无菌间采用全自动方式制造生产，具有良好的可再现性及可追溯性。  2018 年 Zeta Life 公司与美国加利福尼亚大学旧金山校区联合开发用于哺乳动物细胞、活体动物转染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子转染试剂，此技术成为新的全球蛋白功能、免疫细胞及干细胞治疗、研发及生产的主要关键技术之一。
深圳市安培生物科技有限公司是美国 Zeta Life 公司的中国深圳地区总代理。精心经营细胞培养品试剂，均经过反复充分验证，产品效果好且重复性佳。尊敬的客户您如在订购过程中遇到任何问题都可以与我司在线客服联系寻求帮助。