产品概述：

Biozellen细胞3D培养基质胶套装

Biozellen®基质胶特点

1、100%植物源材料，无任何动物成分；

2、胺基酸序列100%人源化 ；

3、可调控基质胶硬度进行多种细胞培养；

4、3D细胞/类器官培养种类数量范围更广；

5、无人畜共通病原菌或毒素风险；

6、较为适用于医疗级生物原料；

7、高活性、高纯度、可融化；

8、4度运输、4度保存；

9、2年保存时间；

10、3D培养结束后基质胶可以温和融化，并保留3D细胞/类器官结构完整性；

Biozellen细胞3D培养基质胶套装

Catalog No.   B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10

Specification  2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

Storage       4℃保存、 保存两年

一、产品描述

Biozellen®3D细胞培养基质胶套装包含整套基质胶、胶体固定液、胶体溶解液，可应用到3D细胞培养与微环境应用等；本试剂盒操作便利且可调控基质胶硬度进行多种细胞培养测试；植物胶体可快速形成水凝胶， 请操作前详细阅读此使用指南。

（Biozellen®3D细胞培养基质胶套装为植物来源，无动物成分）

二、应用

•3D细胞球体培养试验

•小鼠皮下成瘤

•细胞迁移实验

•适合用于3D细胞药物筛检平台

•细胞生长和分化

•代谢/毒理学研究

三、样本类型

•肿瘤细胞系、

四、试剂盒组分

五、使用步骤：

A、试剂制备

A基质胶：将A基质胶溶于37℃水浴槽回温10分钟， 确认*融解.

C缓冲溶液(1X)制备：使用前将10X C缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如： 无血清DMEM、opt-MEM) 制备成 1X C 缓冲溶液。(不要用 PBS 稀释 C 缓冲液) .

D 缓冲溶液(1X)制备: 使用前用冷的 1x PBS 稀释 10X D 缓冲溶液至 1X D 缓冲溶液.

B、Biozellen®3D细胞培养基质胶的制备

全部步骤需要在无菌环境内操作，操作步骤如下：

1. 将24孔培养板放置于冰上预冷半小时。
2. 细胞计数后取 2×105~2×107 细胞与 0.5 毫升 37℃ 细胞培养基均匀混合，并与0.5毫升37℃ A胶按照 1:1 等比例均匀混合，最终细胞密度1*105~1*107cells/mL。

注：请选择适当的培养溶液与条件进行试验。

3.取 20-40 微升步骤 2的混合液滴于 步骤 1 预冷的培养板上，胶体将于 5 分钟内成胶。 注: 测试胶体是否成胶，可用微量吸管尖温和的触碰胶体表面进行确认。

4.待胶体成胶后，添加1毫升冰的1X C缓冲溶液，并盖过步骤3 的胶溶液，固定 15 分钟。

5.待15分钟固定后，小心的吸取 C 缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液。

6将含有细胞的胶于37°C 二氧化碳培养箱内进行7~14天的培养，并观察细胞球体的形成，按正常培养基更换频率进行更换操作。

C、溶胶与收集细胞球体准备程序

小心的将培养基吸取移除，并用1X PBS进行清洗。

小心的将 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的D缓冲溶液，盖过胶滴于室温反应 5分钟。

温和的用1毫升移液管吸取，直到胶滴*溶解。

将含有细胞球体的溶液吸入1.5 毫升离心管，用1000 rpm的转速离心10分钟，移除上清液体并收集细胞球体做分析。

D、收集单颗细胞准备程序

在分离单细胞前，先按上述溶胶与收集细胞球体准备程序进行操作

1. 添加trypsin-EDTA并与收集的细胞球体于37°C混合反应。

2. 用1毫升移液管混合，直到细胞体*分解。

3. 待细胞球体*分解，加入3倍体积的1X PBS，并用1000转的转速进行离心10分钟，并移除上清液体收集沉淀的单细胞做分析。

E、细胞迁移实验准备程序

1. 准备Transwell装置及无血清DMEM细胞培养液 (用于稀释A胶)。

2. A胶 (2X) (货号:B-P-00002-A) 置于37 ℃水浴槽回温10分钟，确认*融解。

3. 用无血清DMEM细胞培养液将A胶 (2X)稀释50倍。

4. 根据Transwell上室底部面积加入100-120 ul/cm2稀释后的A 胶稀释液到Transwell上室中。

5. 将步骤4在4 ℃冰箱孵育30分钟。

6. 将多余的稀释液吸出，并在Transwell上室中加入无血清的癌细胞系细胞悬浮液使细胞浓度约7.5 x 104 cells/well.。

7. 在Transwell下室中加入含10 %血清的细胞培养液做为chemoattractant，吸引癌细胞系进行迁移。

F、小鼠皮下成瘤实验准备程序

1. 将 A胶 (2X) (货号:B-P-00002-A) 置于37 ℃水浴槽回温10分钟，确认*融解。

2. 将C缓冲溶液(10X) 货号:B-P-00002-C)与冰的无血清细胞培养液 (例如: 无血清DMEM或内含VEGF、heparin的无血清DMEM) 按1:4比例均勻混合配置。(例如:1 ml C缓冲溶液(10X) 與 4 ml 无血清DMEM混合，不可用PBS稀释)

3. 将 A胶 (2X) 与约2*106 cells/ml的癌细胞系悬浮液按1:1等比例均匀混合配置，癌细胞系悬浮液最终浓度约为106 cells/ml。

4. 选用21-25 G的针头 (避免破坏细胞)，抽取0.2-0.3 ml 预冷稀释后的C缓冲溶液。(C缓冲溶液用于A胶成胶反应)

5. 使用步骤4的同一支针管，再抽取0.1-0.7 ml含细胞的A胶混合液，在冰上孵育五分钟。

6. 以皮下注射方式注射0.3-1.0 ml至小鼠。(需一次注射完含C缓冲溶液的A膠混合液)

注1: 注射体积可依不同实验目的做调整，若为血管生成研究注射体积需至少0.5 ml。

注2: 此步骤依实验需求可执行或不执行，若需呈现明显的皮下注射隆起效果，可于注射完毕后，在小鼠注射部位冰敷5-10分钟

，若需呈现明显的皮下注射隆起效果，可于注射完毕后，在小鼠注射部位冰敷5-10分钟。

7. 培养一至三周后可摘取接种的肿瘤组织。

注3: 若为血管生成研究，应注射含VEGF及heparin的A胶，以促进血管生成。约三天后，可摘取含有新血管生成的肿瘤组织。

六、案例分享

A.形成3D肿瘤球体成功案例分享

B.Biozellen基质胶被溶解后分离的完整3D细胞结构照片

培养后的3D细胞球体， 在Biozellen基质胶被试剂盒里面的

D Buffer溶解分离后仍然可以得到完整的3D细胞结构

深圳市安培生物科技有限公司是美国Biozellen公司的中国代理商。Biozellen®3D培养基质胶大量现货，经验证可*替代BD/康宁的基质胶，来源为植物源且氨基酸序列100%人源化，无人畜共患病的病原菌或毒素污染，提供完整售后服务和技术支持。尊敬的客户您如在订购过程中遇到任何问题都可以与我司客户经理联系寻求帮助。