反相色谱（Reverse Phase Chromatography，RPC）是一种基于样品成分在不同亲水性条件下在固定相和流动相之间的相互作用来实现分离和定量的色谱技术。它在医药、化工、生物等领域有广泛的应用。

原理：

RPC的固定相通常是非极性的，如C18（十八烷基）键合硅胶，而流动相则是极性的，如水和有机溶剂（如甲醇、乙腈等）的混合物。样品通过色谱柱时，根据溶质的疏水性（即亲水性）差异进行分离。疏水性越大的溶质在固定相上的保留时间越长，因此洗脱时间越晚；而亲水性越大的溶质在流动相中的移动速度越快，因此洗脱时间越早。

影响因素：

固定相：固定相的种类和链长会影响样品的保留值。例如，C18固定相适用于大多数化合物，包括非极性和极性小分子。

流动相组成：流动相的极性越大，溶质的分配系数越大，洗脱时间越短。通常采用降低流动相极性（水含量）的线性梯度洗脱法。

温度：温度+，流动相黏度-，流动速度+，且流动相与固定相之间的传质速度+，使分辨率增加。但温度上升也会导致疏水性作用减弱，因此升高温度时需要考虑目标物质的热稳定性。

样品的分子结构：样品的极性越弱，疏水性越强，保留值越大。

色谱柱的选择：

色谱柱的选择对RPC的分离效果至关重要。常用的色谱柱包括C18、C8、苯基柱等，它们适用于不同的化合物和分离需求。例如，C18色谱柱是通用型色谱柱，适用于多种化合物的分析。

应用：

RPC在蛋白质、肽、氨基酸、核酸、甾类、脂类、脂肪酸、糖类、植物碱等含有非极性基团的各种物质的分离中都有应用。例如，它可以用于合成寡核苷酸的快速与高分离度分离等。