COV434 人卵巢颗粒肿瘤细胞

（Human Ovarian Granular Tumor Cells）

COV434 人卵巢颗粒肿瘤细胞

一、T25 细胞收到后处理

1、观察

细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满完*培养基并密封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞后，请

先打开外包装，及时核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订购的细胞名称一致，并仔细查看培养瓶是否有

破损或漏液等异常情况，如有破损或漏液等异常情况，请立即拍照，并联系工作人员处理。

2、处理

（1）75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部。

（2）待酒精挥发完*，在显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（40x，100x，200x，

各三张）。前三天的细胞照片为重要的售后依据，不提供照片默认收到时细胞状态良好。

（3）不要打开培养瓶盖，将细胞放入培养箱中静置 2-4 小时后再做处理，以稳定细胞状态。

（4）查看细胞说明书，按照细胞说明书中描述的培养参数进行常规细胞培养操作（见“细胞说明书”第一

页）。  贴壁细胞

 未超过 80%汇合度时，将培养瓶中的完*培养基收集至 50mL 离心管中（对比培养使用），留大约

7mL 完*培养基在细胞培养瓶中，放入培养箱中继续培养。

 超过 80%汇合度时，将培养瓶中的完*培养基收集至 50mL 离心管中（对比培养使用），根据情况进

行传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。首*传代，建议 1:2 进行传代（分两个 T25）。传代时

建议一瓶用原瓶中的完*培养基，另外一瓶用自行配制的完*培养基，二者进行对比培养。

 若细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。请将培养瓶中所有培养液收集至

50mL 离心管，1000rpm 离心 5 分钟，收集上清（对比培养使用），往细胞沉淀中加入胰，酶 1-2mL，

轻轻吹打，重悬，消化 1-2 分钟后，加入 5mL 完*培养基终止消化。1000rpm 离心 5 分钟，弃去上

清，加入 1-2mL 完*培养基重悬细胞。然后按 1:2 的比例进行传代（分两个 T25），补充完*培养基

至 5-8mL/瓶，放入细胞培养箱中培养。 二、冻存细胞收到后处理

1、观察

收到细胞后，请检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损、干冰已完*挥发等问题，请立即

拍照，并联系工作人员处理。

2、处理

（1）迅速将细胞取出转移至液氮保存，建议尽早复苏。

（2）复苏第一管如有细胞活性问题，请对细胞进行不同倍数拍照（40x，100x，200x，各三张），并及时

联系工作人员处理，后续会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。特别说明：未与我方联系擅自复苏

第二管，出现问题不予售后。

三、细胞复苏

（1）确认水浴锅已升温至 37℃，取 5mL 预热的完*培养基于 15mL 离心管中待用。

（2）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中

无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁。

（3）将冻存管中的细胞转移至含 5mL 完*培养基的 15mL 离心管中，1000rpm 离心 5 分钟。

（4）弃尽上清，细胞沉淀用 1-2mL 完*培养基重悬，接种至 T25 培养瓶，补充完*培养基至 5-8mL/瓶，

放入细胞培养箱中培养。

（5）贴壁 5 小时以上或次日，更换新鲜的完*培养基继续培养。 四、细胞传代

（1）细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。首先，弃去培养上清，用 PBS 漂洗细胞 1-2 次。

（2）加入 1-2mL 消化液，置于培养箱中消化适当时间，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部

分变圆并脱落，即消化完*，将细胞迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入与消化液等体积的含 10%血

清的完*培养基终止消化。

（3）轻轻吹打细胞，待细胞完*脱落后转移至 15mL 离心管，1000rpm 离心 5 分钟。

（4）弃去上清液，然后按推荐比例进行分瓶传代（收到细胞后首*进行传代，推荐 1:2 比例进行分瓶传

代），补充完*培养基至 5-8mL/瓶。

（5）放入细胞培养箱中继续培养。 五、细胞冻存

（1）细胞生长状态良好，细胞密度达 80%-90%，即可进行细胞冻存。首先，弃去培养上清，用 PBS 漂洗

细胞 1-2 次。

（2）加入 1-2mL 消化液，置于培养箱中消化适当时间，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部

分变圆并脱落，即消化完*，将细胞迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入与消化液等体积的含 10%血

清的完*培养基终止消化。

（3）轻轻吹打细胞，待细胞完*脱落后转移至 15mL 离心管，1000rpm 离心 5 分钟。

（4）弃去上清液，往细胞沉淀中加入 1mL/支的立谱沃无血清冻存液（货号：PZ110R），混匀后加入冻存

管中，并做好标记。

（5）将冻存细胞直接放入－80℃冰箱即可（如果追求更理想的细胞复苏率，也可选择使用程序降温盒），

24 小时后转入液氮中长期储存，并做好储存记录。